哈士蟆油(Oviductus Ranae)为蛙科动物中国林蛙(Rana chensinensis)雌性成体输卵管的干制品,是我国传统名贵药材,含有多种营养成分及保健功能因子,素有“软黄金”之称。传统中医证实它具有健脾胃、滋阴补肾、润肺生津之功效。对体虚气弱、气血亏损、精力耗损、记忆力不佳、神经性头痛、神经衰弱均有疗效。在国内外享有盛誉,走俏于我国南方经济发达地区和美国、日本、东南亚等国内外市场,价格极为昂贵,具有极大的市场开发前景。但却少见哈士蟆油抗疲劳作用的系统的研究报道。基于此,本课题进行如下研究:1.利用生物酶解技术加工处理哈士蟆油,并按卫生部的《保健食品功能学评价程序与检验方法》对哈士蟆油酶解物进行抗疲劳作用的功能学评价,同时确定了其抗疲劳的最优化剂量。结果显示:哈士蟆油酶解物能显著延长小鼠负重游泳时间、提高肝糖元含量、降低血清尿素氮的含量,说明哈士蟆油具有抗疲劳之功效。同时本文确定其抗疲劳的最优化剂量为500 mg/kg.2.以小鼠负重游泳时间作为评价指标,对按中医理论辅以的健脾、益肾、理肝的13味中药提取物进行抗疲劳作用的初筛,并运用正交设计法对由哈士蟆油和初筛出的4味中药组成的复方进行优化,并对较优化复方进行抗疲劳作用的功能学评价,优选出最佳哈士蟆油抗疲劳复方。结果显示:(1)哈士蟆油与红景天、人参、绞股蓝、肉苁蓉这4味中药配伍小鼠的负重游泳时间较长。通过正交试验得到2个较优化复方,2个较优化复方均能显著延长小鼠负重游泳时间、提高肝糖元含量、降低血清尿素氮、血乳酸含量,说明具有抗疲劳之功效。(2)哈士蟆油抗疲劳复方的配方为:哈士蟆油500 mg,红景天220 mg,肉苁蓉200 mg,绞股蓝80 mg,人参200 mg;增加糖原储备、减少血尿氮的产生、减少乳酸的产生和加快乳酸的消除是哈士蟆油复方发挥抗疲劳作用的主要途径。3.利用大鼠运动模型,运用半定量反转录聚合酶链式反应方法研究了最优化复方对大鼠骨骼肌α-actin mRNA表达的影响,从基因表达水平探讨其抗疲劳的作用机理,为哈士蟆油保健品的进一步研究开发奠定理论基础。结果显示:大鼠灌胃哈士蟆油复方30 d后,运动给药组大鼠骨骼肌α-actin mRNA的表达量显著高于安静组和运动不给药组。说明哈士蟆油复方对大鼠骨骼肌α-actin mRNA表达有着显著的影响作用。4.以红景天为药物模型,选择适宜的油相、表面活性剂和助表面活性剂,利用伪三元相图,以新型纳米乳为载体,研制出适合口服的复方纳米乳剂。研究结果表明:以蓖麻油聚氧乙烯醚60(RH60)和卵磷脂为表面活性剂,1,3-丙二醇作为助表面活性剂和肉豆蔻酸异丙酯(IPM)为油相制备的纳米乳系统稳定,透射电镜下呈圆球形,分布均匀,平均粒径在60nm左右。综上所述:哈士蟆油具有明显的抗疲劳之功效,而增加糖原储备、减少血尿氮的产生、减少乳酸的产生和加快乳酸的消除是哈士蟆油复方抗疲劳的主要途径。而以红景天为药物模型制备的纳米乳系统稳定,且制备过程简单,成本较低,采用纳米乳作为药物载体制备口服哈士蟆油复方纳米乳是可行的。