【摘 要】
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目的: 利用半乳糖-聚乙烯亚胺(galactose-polyethyleneimine,Gal-PEI)作为载体,通过肝实质细胞表面特有的半乳糖受体介导的内化作用使PCNA反义核酸进入肝癌Bel-7402细胞,
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目的: 利用半乳糖-聚乙烯亚胺(galactose-polyethyleneimine,Gal-PEI)作为载体,通过肝实质细胞表面特有的半乳糖受体介导的内化作用使PCNA反义核酸进入肝癌Bel-7402细胞,在离体水平观察其对肝癌细胞的靶向投递作用和对肝癌细胞增殖的抑制作用,为反义核酸的导入方法和肝癌的反义基因治疗提供实验依据。 方法: 1.选择来源于3个不同系统的肿瘤细胞:肝癌Bel-7402细胞、肺腺癌GLC-82细胞、慢性髓系白血病K562细胞,将Gal-PEI与PCNA反义核酸作用形成Gal-PEI-ASODN交联复合物,台盼兰拒染细胞计数法观察不同浓度Gal-PEI-ASODN对这3种细胞增殖的影响;流式细胞仪检测3种细胞对羧基荧光素(carboxyfluorescein,FAM)标记的Gal-PEI-ASODN的摄取率及细胞内平均荧光强度;相差/荧光显微镜观察FAM标记的Gal-PEI-ASODN及ASODN进入3种不同细胞的情况。 2.台盼兰拒染细胞计数法观察不同浓度ASODN或Gal-PEI-ASODN对Bel-7402细胞增殖的影响;不同时间Gal-PEI-ASODN对Bel-7402细胞增殖的影响。流式细胞仪检测Gal-PEI-ASODN作用于Bel-7402细胞48h后,细胞亚二倍体百分率;DNA电泳观察有无DNALadder的形成;Hochest 33258染色观察细胞凋亡的形态学改变。 3.改良MTT法(CCK-8细胞计数试剂)检测单纯使用化疗药物以及联合ASODN
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