论文部分内容阅读
目的：
探讨维甲酸X受体(RetinoidXReceptor，RXR)介导的氧化应激途径对大鼠肺缺血／再灌注损伤(pulmonaryischemia/reperfusioninjury，PIRI)的干预作用及其机制。
方法：
将70只SPF级健康SD大鼠随机分为七组(n=10)：正常对照组(C)、假手术组(S)、假手术+RXR激动剂9顺式维甲酸(9-cisretinoidacid，9-cRA)组(S+c-RA，SRA)、假手术+RXR抑制剂HX531组(S+HX531，SH)、肺缺血／再灌注组(I/R)、肺缺血／再灌注+RXR激动剂9-顺式维甲酸组(RA)、肺缺血／再灌注+RXR抑制剂HX531组(HX531)。以左肺门钳夹30min，再灌注180min建立肺缺血／再灌注损伤模型。C组不做任何处理；S组只做开胸处理，肺门不予以夹闭，维持机械通气210min;I/R组在左肺门夹闭30min再灌注180mln;模型组SRA，SH、RA、HX531于造模前90min以每公斤5毫克的量腹腔内注射s-顺式维甲酸(5mg/kg)；SH组、HX531组在术前30min以每公斤5毫克的量腹腔内注射HX531。再灌注180min后，取肺组织，测定肺湿／干、总肺含水量、肺泡损伤及氧化应激相关指标如超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)定量评价指标。HE染色观察肺组织病理形态，透射电镜观察细胞器超微结构，免疫荧光标记法观察各肺组织RXRα的表达情况；Westernblot检测肺组织核因子E2相关因子(Nrf2)蛋白的表达；RT-PCR法检测Nrf2mRNA的表达。
结果：
1．各组肺湿／干比及总肺水含量变化
与C组、S组、SRA组和SH组相比，I/R组、RA组和HX531组的肺W/D、TLW均有明显升高（P＜0.05）；与I/R组相比，RA组肺W/D、TLW明显下降（P＜0.05），而HX531组差异无统计学意义(P＞0.05)；与RA组相比，HX531组肺W/D、TLW明显升高（P＜0.05）；C组、S组、SRA组和SH组四组之间两两相互比较肺W/D、TLW变化无统计学差异(P＞0.05)。
2．各组肺组织病理形态学变化
光镜下观察可见，C组肺间质及肺泡结构清晰完整，间质无水肿，肺泡内无渗出液或红细胞；S组、SRA组和SH组肺间质及肺泡结构基本完整，肺毛细血管轻微扩张充血，肺泡腔内可见散在分布的红细胞与炎性细胞；I/R组与HX531组肺泡结构紊乱，局部肺泡壁有水肿增厚，肺间质水肿，肺泡腔内可见大量红细胞漏出，肺泡壁内有较多炎性细胞浸润；RA组与I/R组、HX531组相比，肺泡结构轻微紊乱，肺泡腔内红细胞漏出减少，肺间质水肿程度及肺泡壁内炎性细胞浸润程度均有所减轻。
3．各组肺泡损伤定量评估指标的变化
与C组相比，SRA与SH组的IQA升高（P＜0.05），S组无统计学差异（P＞0.05）；与C组、S组、SRA组和SH组相比，I/R组、RA组和HX531组的IQA明显升高（P＜0.05）；与I/R组相比，RA组IQA明显下降（P＜0.05），而HX531组差异无统计学意义(P＞0.05）；与RA组相比，HX531组IQA明显升高（P＜0.05）；S组、SRA组和SH组三组之间两两相互比较IQA变化无统计学差异(P＞0.05)。
4．各组肺组织超微结构的变化
电镜下观察可见，C组肺泡Ⅱ型上皮细胞结构完整，线粒体、板层小体和微绒毛丰富且形态正常；S组、SRA组与SH组肺泡Ⅱ型上皮细胞结构轻度紊乱，线粒体轻度水肿，个别板层小体出现轻度空泡化现象，部分微绒毛脱落；I/R组与HX531组肺泡Ⅱ型上皮细胞结构严重紊乱，线粒体高度水肿且数量减少，板层小体出现严重空泡化，微绒毛结构消失；RA组较I/R组与HX531组，肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤减轻，肺泡与内皮细胞超微结构较为清晰完整，线粒体肿胀减轻，板层小体数目较多且空泡化现象减少，微绒毛结构可见。
5．各组肺组织免疫荧光检测结果
光镜下观察可见，C组、S组、SH组的RXRα表达量较低，SRA组的RXRα表达量较高；与C组、S组、SH组相比，I/R组、RA组与HX531组的RXRα表达量增加；与I/R组和HX531组相比，RA组的RXRα表达水平有所增高；I/R组与HX531组的RXRα表达水平相似。
6．各组肺组织SOD、MDA、MPO变化
与C组、S组、SRA组和SH组相比，I/R组、RA组和HX531组的SOD活力降低，MDA含量和MPO活力均有明显升高（P＜O.05）；与I/R组相比，RA组SOD活力增高，MDA含量和MPO活力明显下降（P＜O.05），而HX531组的变化差异无统计学意义（P＞O.05）；与RA组相比，HX531组SOD活力降低，MDA含量和MPO活力明显升高（P＜O.05）；C组、S组、SRA组和SH组四组之间两两相互比较SOD活力、MDA含量和MPO活力变化无统计学差异(P＞O.05)。
7．各组肺组织Westernblot检测结果
与C组、S组、SRA组和SH组相比，I/R组、RA组和HX531组的Nrf2蛋白表达明显降低（P＜0.05）；与I/R组相比，RA组Nrf2蛋白表达明显增高（P＜0.05），而HX531组的变化无统计学差异(P＞0.05)；与RA组相比，HX531组Nrf2蛋白表达明显降低（P＜0.05）；C组、S组、SRA组和SH组四组之间两两相互比较蛋白表达变化无统计学差异（P＞0.05）。
8．各组肺组织RTPCR检测结果
与C组、S组、SRA组和SH组相比，I/R组、RA组和HX531组的Nrf2mRNA表达明显降低（P＜0.05）；与I/R组相比，RA组Nrf2mRNA表达明显升高（P＜0.05），而HX531组的变化差异无统计学意义（P＞0.05）；与RA组相比，HX531组Nrf2mRNA表达明显降低（P＜0.05）；C组、S组、SRA组和SH组四组之间两两相互比较mRNA表达变化无统计学差异(P＞0.05)。
结论：RXR的激活能有效减轻大鼠肺缺血／再灌注损伤，对肺组织起保护作用，可能与激活Nrf2信号通路、增强抗氧化水平、减少氧化应激反应途径有关。
探讨维甲酸X受体(RetinoidXReceptor，RXR)介导的氧化应激途径对大鼠肺缺血／再灌注损伤(pulmonaryischemia/reperfusioninjury，PIRI)的干预作用及其机制。
方法：
将70只SPF级健康SD大鼠随机分为七组(n=10)：正常对照组(C)、假手术组(S)、假手术+RXR激动剂9顺式维甲酸(9-cisretinoidacid，9-cRA)组(S+c-RA，SRA)、假手术+RXR抑制剂HX531组(S+HX531，SH)、肺缺血／再灌注组(I/R)、肺缺血／再灌注+RXR激动剂9-顺式维甲酸组(RA)、肺缺血／再灌注+RXR抑制剂HX531组(HX531)。以左肺门钳夹30min，再灌注180min建立肺缺血／再灌注损伤模型。C组不做任何处理；S组只做开胸处理，肺门不予以夹闭，维持机械通气210min;I/R组在左肺门夹闭30min再灌注180mln;模型组SRA，SH、RA、HX531于造模前90min以每公斤5毫克的量腹腔内注射s-顺式维甲酸(5mg/kg)；SH组、HX531组在术前30min以每公斤5毫克的量腹腔内注射HX531。再灌注180min后，取肺组织，测定肺湿／干、总肺含水量、肺泡损伤及氧化应激相关指标如超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)定量评价指标。HE染色观察肺组织病理形态，透射电镜观察细胞器超微结构，免疫荧光标记法观察各肺组织RXRα的表达情况；Westernblot检测肺组织核因子E2相关因子(Nrf2)蛋白的表达；RT-PCR法检测Nrf2mRNA的表达。
结果：
1．各组肺湿／干比及总肺水含量变化
与C组、S组、SRA组和SH组相比，I/R组、RA组和HX531组的肺W/D、TLW均有明显升高（P＜0.05）；与I/R组相比，RA组肺W/D、TLW明显下降（P＜0.05），而HX531组差异无统计学意义(P＞0.05)；与RA组相比，HX531组肺W/D、TLW明显升高（P＜0.05）；C组、S组、SRA组和SH组四组之间两两相互比较肺W/D、TLW变化无统计学差异(P＞0.05)。
2．各组肺组织病理形态学变化
光镜下观察可见，C组肺间质及肺泡结构清晰完整，间质无水肿，肺泡内无渗出液或红细胞；S组、SRA组和SH组肺间质及肺泡结构基本完整，肺毛细血管轻微扩张充血，肺泡腔内可见散在分布的红细胞与炎性细胞；I/R组与HX531组肺泡结构紊乱，局部肺泡壁有水肿增厚，肺间质水肿，肺泡腔内可见大量红细胞漏出，肺泡壁内有较多炎性细胞浸润；RA组与I/R组、HX531组相比，肺泡结构轻微紊乱，肺泡腔内红细胞漏出减少，肺间质水肿程度及肺泡壁内炎性细胞浸润程度均有所减轻。
3．各组肺泡损伤定量评估指标的变化
与C组相比，SRA与SH组的IQA升高（P＜0.05），S组无统计学差异（P＞0.05）；与C组、S组、SRA组和SH组相比，I/R组、RA组和HX531组的IQA明显升高（P＜0.05）；与I/R组相比，RA组IQA明显下降（P＜0.05），而HX531组差异无统计学意义(P＞0.05）；与RA组相比，HX531组IQA明显升高（P＜0.05）；S组、SRA组和SH组三组之间两两相互比较IQA变化无统计学差异(P＞0.05)。
4．各组肺组织超微结构的变化
电镜下观察可见，C组肺泡Ⅱ型上皮细胞结构完整，线粒体、板层小体和微绒毛丰富且形态正常；S组、SRA组与SH组肺泡Ⅱ型上皮细胞结构轻度紊乱，线粒体轻度水肿，个别板层小体出现轻度空泡化现象，部分微绒毛脱落；I/R组与HX531组肺泡Ⅱ型上皮细胞结构严重紊乱，线粒体高度水肿且数量减少，板层小体出现严重空泡化，微绒毛结构消失；RA组较I/R组与HX531组，肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤减轻，肺泡与内皮细胞超微结构较为清晰完整，线粒体肿胀减轻，板层小体数目较多且空泡化现象减少，微绒毛结构可见。
5．各组肺组织免疫荧光检测结果
光镜下观察可见，C组、S组、SH组的RXRα表达量较低，SRA组的RXRα表达量较高；与C组、S组、SH组相比，I/R组、RA组与HX531组的RXRα表达量增加；与I/R组和HX531组相比，RA组的RXRα表达水平有所增高；I/R组与HX531组的RXRα表达水平相似。
6．各组肺组织SOD、MDA、MPO变化
与C组、S组、SRA组和SH组相比，I/R组、RA组和HX531组的SOD活力降低，MDA含量和MPO活力均有明显升高（P＜O.05）；与I/R组相比，RA组SOD活力增高，MDA含量和MPO活力明显下降（P＜O.05），而HX531组的变化差异无统计学意义（P＞O.05）；与RA组相比，HX531组SOD活力降低，MDA含量和MPO活力明显升高（P＜O.05）；C组、S组、SRA组和SH组四组之间两两相互比较SOD活力、MDA含量和MPO活力变化无统计学差异(P＞O.05)。
7．各组肺组织Westernblot检测结果
与C组、S组、SRA组和SH组相比，I/R组、RA组和HX531组的Nrf2蛋白表达明显降低（P＜0.05）；与I/R组相比，RA组Nrf2蛋白表达明显增高（P＜0.05），而HX531组的变化无统计学差异(P＞0.05)；与RA组相比，HX531组Nrf2蛋白表达明显降低（P＜0.05）；C组、S组、SRA组和SH组四组之间两两相互比较蛋白表达变化无统计学差异（P＞0.05）。
8．各组肺组织RTPCR检测结果
与C组、S组、SRA组和SH组相比，I/R组、RA组和HX531组的Nrf2mRNA表达明显降低（P＜0.05）；与I/R组相比，RA组Nrf2mRNA表达明显升高（P＜0.05），而HX531组的变化差异无统计学意义（P＞0.05）；与RA组相比，HX531组Nrf2mRNA表达明显降低（P＜0.05）；C组、S组、SRA组和SH组四组之间两两相互比较mRNA表达变化无统计学差异(P＞0.05)。
结论：RXR的激活能有效减轻大鼠肺缺血／再灌注损伤，对肺组织起保护作用，可能与激活Nrf2信号通路、增强抗氧化水平、减少氧化应激反应途径有关。