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头足类软体动物的免疫系统还很不成熟,主要依赖血细胞吞噬、水解酶、氧化酶、活性氧等介导的非特异性免疫抵御病原生物,但头足类体内具有脑啡肽(enkephalin,ENK)、白细胞介素-1(interleuldns-1,IL-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等活性肽和细胞因子,对其免疫防御起着重要的调节作用。甲硫氨酸脑啡肽(met-enkephalin,Met-ENK)是一种阿片神经肽。随着阿片肽及其受体功能研究的深入,人们发现阿片肽对心血管系统、消化系统、呼吸系统等都有重要的调节作用。而有关短蛸(Octopus ocellatus)Met-ENK免疫调节机制的研究还未见报道。本文采用免疫组织化学方法对Met-ENK、δ和μ受体在短蛸各组织器官中的分布进行了研究,且采用生化测定的方法研究了不同浓度的Met-ENK对短蛸血淋巴中几种体液免疫因子或自由基的影响,以期为头足类软体动物免疫学研究积累资料。
免疫组织化学定位结果表明:(1)在短蛸的脑神经节、足神经节、脏神经节、视神经节、外套神经节、口球、食道、嗉囊、胃、胃盲囊、肠、直肠、前唾液腺、后唾液腺、肝胰脏、鳃、鳃腺、心室、鳃心、肾静脉腺质附属物、卵巢、输卵管腺、外套膜背面、外套膜腹面、腕、腕间膜、漏斗中检测到呈不同阳性反应的Met-ENK分子。 (2)在短蛸的脑神经节、足神经节、脏神经节、外套神经节、口球、食道、嗉囊、胃、胃盲囊、肠、后唾液腺、鳃、鳃腺、心室、鳃心、肾静脉腺质附属物、卵巢、输卵管腺、外套膜背面、外套膜腹面、腕、腕间膜、漏斗中检测到呈不同阳性反应的δ受体。(3)在短蛸的食道、胃、外套膜背面、腕间膜中检测到呈不同阳性反应的μ受体。Met-ENK和δ、μ受体在短蛸体内不同部位的分布,表明Mot-ENK通过与δ、μ受体结合,可能参与了短蛸神经、消化、呼吸、排泄、感觉、运动和免疫等功能的调节。神经系统分泌的Met-ENK,可能沿神经纤维或血液循环分布到其它组织。而Met-ENK和δ、μ受体在短蛸不同部位分布密度的不同,可能与各器官的功能不同有关。
生化测定结果表明: (1)Met-ENK浓度为1.00μg/ml和5.00μg/ml时,对短蛸血清MetAP活力有较弱的抑制作用;Met-ENK浓度为25.00μg/ml时,对短蛸血清MetAP活力有较强的抑制作用。Met-ENK对短蛸血细胞MetAP活力有很强的促进效应,且此效应具浓度依赖性。 (2)Met-ENK浓度为1.00μg/ml和25.00μg/ml时,短蛸血细胞CAT活力均高于对照组;3种浓度的Met-ENK,实验组血清CAT活力均低于对照组。Met-ENK浓度为5.00μg/ml和25.00μg/ml时,血细胞H2O2含量均高于对照组,Met-ENK浓度为1.00μg/ml时,实验组血细胞H2O2含量低于对照组;3种浓度的Met-ENK,实验组血清H2O2含量均低于对照组。(3)Met-ENK对不依赖卤素的短蛸血清MPO活力有较弱的抑制效应,且此效应具浓度依赖性。低浓度的Met-ENK对短蛸血细胞MPO活力有很强的促进作用,较高浓度的Met-ENK对短蛸血细胞MPO活力有较弱的促进作用。(4)Met-ENK可使短蛸血清和血细胞中GSH含量减少,可降低短蛸血淋巴的抗氧化能力。(5)Met-ENK对短蛸血清ANAE活力有很强的抑制作用。低浓度的Met-ENK对短蛸血细胞ANAE活力有较强的抑制作用,较高浓度的Met-ENK对短蛸血细胞ANAE活力有很强的抑制作用。总之,Met-ENK对短蛸起着重要的免疫调节作用,其作用机制可能是通过与血细胞表面的受体结合而起作用的。