转录因子FOXM1的核酸适配体筛选与应用

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人类FOXM1蛋白属于Forkhead Box(Fox)转录因子家族,到目前为止这个家族在人类基因组中拥有至少50个成员,分别参与调节了细胞的分化、增殖、代谢与凋亡等生理过程,同时还对肿瘤发生和发展具有重要意义。FOXM1是一个与细胞增殖相关的转录因子,它被发现在人类的多种肿瘤细胞中都存在较高的表达水平,表明FOXM1与多种癌症的发生密切相关,如肝癌、肺癌、前列腺癌和乳腺癌等。因此,对FOXM1的深入研究将有助于进一步揭示肿瘤发生的发病机理,并为抗肿瘤药物的研发提供可能的新靶点。针对蛋白功能研究,目前传统方法多采用抗体免疫手段。近年来核酸适配体在生物分析、疾病诊断、治疗、药物筛选等方面的应用引起了人们极大的兴趣,以核酸适配体取代抗体利用ELISA和流式细胞技术检测蛋白质的表达,可以比使用抗体获得更高的灵敏度。同时核酸适配体可以通过核酸化学方法进行制备,经过相应的修饰及生物功能化,能够达到对生物大分子、细胞等生物靶标的选择性检测、定位和其生物功能的调控。由于具有以上特点,核酸适配体在生物医学基础研究和临床诊断与治疗方面显示出巨大的应用前景。本文以重组的GST-FOXM1融合蛋白作为靶蛋白,GST蛋白作为反筛蛋白,以包含有77个碱基的随机单链DNA寡核酸库作为初始库,经过7轮筛选,获得了1条与靶蛋白FOXM1高特异性与高亲和力结合的单链DNA核酸适配体JX42,该适配体与FOXM1的解离常数Kd达到225nM。进一步研究发现核酸适配体JX42在复杂体系中也可以特异性地识别FOXM1。因此利用该核酸适配体能够高特异性、高亲和性地结合FOXM1蛋白的这一特点,把此核酸适体发展为研究FOXM1的有力工具,并且可以发展成为一种用于研究与FOXM1相关的人类恶性肿瘤及其他疾病的靶向探针。
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