【摘 要】
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目的:本研究旨在深入探讨载脂蛋白A-I模拟肽D-4F减轻造影剂诱导的血管内皮氧化损伤的分子机制。方法:体外实验:本研究分离与培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs),利用活性氧探
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目的:本研究旨在深入探讨载脂蛋白A-I模拟肽D-4F减轻造影剂诱导的血管内皮氧化损伤的分子机制。方法:体外实验:本研究分离与培养原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs),利用活性氧探针测定内皮细胞中活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)的释放,利用Western blot检测D-4F对AMPK磷酸化的激活,检测造影剂对NOX的激活及表达,造影剂时间依赖性的对P65、P47、PKC的激活以及eNOS解耦联,加入AMPK抑制剂Compund C后再次检测NOX的表达水平,P65、P47、PKC的激活以及eNOS解耦联。体内实验:SD大鼠分为Control、Contrast media组、Contrast media+D-4F组,分别行尾静脉注射造影剂,处死并分离出颈动脉,利用免疫组化验证造影剂对血管内皮损伤及粘附分子表达的影响。结果:高倍镜下,造影剂组的颈动脉内皮损伤程度、粘附分子表达水平明显高于D-4F预保护组,造影剂通过激活PKC进一步使其下游的P65,NOX活化以及eNOS解偶联,从而引起活性氧的产生和释放,导致细胞炎症及凋亡的发生,而D-4F可以通过诱导AMPK蛋白磷酸化激活,进一步抑制PKC的激活,进而发挥内皮细胞的保护功能,而加入AMPK抑制剂后其保护效果明显减弱。结论:载脂蛋白A-I模拟肽D-4F通过激活AMPK来抑制PKC及其下游的NOX激活和eNOS解耦联、ROS释放,从而拮抗造影剂诱导的HUVECs凋亡和炎症反应。
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