猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)是一种有囊膜的单股正链RNA病毒，为冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)α亚群成员，目前只有一个血清型。猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea, PED)是由PEDV引起的一种以腹泻、呕吐和脱水为主要特征的猪急性肠道传染病，尤其能引起仔猪死亡，给全世界的养猪业造成了巨大损失。　　2010年冬从华南地区开始，全国各地猪场先后发生严重的“仔猪顽固性腹泻”。为了解猪流行性腹泻在浙江及周边地区的流行情况，本研究采集2011-2013年期间浙江、江西、江苏、山东、湖北5省27个猪场的169份病料进行检测，其中病料PEDV的阳性率为56.8％(96/169)，猪场阳性率为85.2％(23/27)。对其中20个阳性病料中PEDV S-ORF3-E-M-N基因、2个阳性病料中PEDV S基因及2个阳性病料中ORF3-E-M-N基因的序列进行基因扩增和测序，系统进化分析表明:20个PEDV S-ORF3-E-M-N序列彼此之间的DNA同源性为98.3-100％，与2010年之前的毒株的同源性为94.6-96.5％，与疫苗株的同源性为95.2-95.7％。与2010年之前毒株比较，22个S基因的同源性为93.4-96.3％，与疫苗株的同源性为93.7-94.3％，并且在S蛋白的55-56aa(GENQ)和135-136aa(N)有2次插入，在155-156aa(DG)有1次缺失。S蛋白抗原区氨基酸的变化，提示目前该地区流行株可能源于华南株的疫苗株的重组。系统进化分析表明，2010年后的野毒株分为华南地区毒株与其他地区毒株两支;重组分析表明，本研究中的毒株可能为华南毒株与疫苗株的重组结果。在本研究中也首次发现JXZS-3L、JXZS-1223L毒株在N基因后12nt处有一个17nt的插入，ZJJS-Z在N基因后73nt处有一个TA的缺失，这是首次在PEDV3UTR发现的插入和缺失。这些结果表明，目前流行于浙江及周边地区的PEDV毒株与2010年前的毒株比较发生了新的变异。　　以原核表达的PEDV N蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠制备抗N蛋白的单克隆抗体。间接免疫荧光和Western blot检测显示，鼠抗N蛋白的单抗能与PEDV疫苗株及真核转染的N蛋白发生特异性反应。利用细胞融合技术和有限稀释方法得到了6株稳定分泌抗N蛋白抗体的单克隆抗体细胞株。亚型鉴定1株单抗的重链为IgG2b，其余5株单抗重链为IgG1，轻链均为κ链。　　尝试从临床病料中分离病毒，通过在培养液中加入胰酶的方式分离到两株疑似病毒，其细胞病变表现为细胞轻微融合、细胞拉网脱落。氯仿敏感性试验表明该疑似病毒为囊膜病毒。