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自2011年全国猪伪狂犬病反弹性爆发以来,该病仍是影响养猪场生产的重大传染疾病之一。进行ELISA血清学鉴别诊断和有效的基因缺大苗免疫接种,是我国防控该病的主要手段。所以对免疫猪只gB抗体转阳规律及免疫应答进行研究,以及建立客观有效的gB抗体ELISA检测方法,对指导合理的疫苗免疫及本病防控有重要意义。使用IDEXX-PRV-gB/gE试剂盒,跟踪检测某猪场7头产房母猪及对应的21头产房仔猪、46头保育猪的gB/gE抗体。通过检测排除了保育实验猪gE野毒感染的情况,并推测出该场野毒感染压力较小,gB母源抗体能够持续到95-111天,首免可由75天推迟至95天左右进行,然后进行二免,免疫效果较好。此外,小猪首免选择S/N值大于0.5的区间进行,免疫后gB抗体转阳效果较好。这些结论可以指导PRV基因缺失苗的免疫,利于生产中PRV的防控。此外,发现对S/N均在0.1以下的8份母猪gB抗体阳性血清,进行稀释100倍、200倍、400倍后再检测,才能明显区分个体间gB抗体水平差异,说明IDEXX-PRV-gB试剂盒评估母猪血清抗体方而存在缺陷。通过使用大肠杆菌原核表达系统,对PRV保守糖蛋白gB的86aa-480aa和540aa-734aa片段对应的基因序列进行截短表达,对表达出的gB-M和gB-N两个包涵体蛋白进行尿素溶解和纯化,进行Western-blot实验后,发现两蛋白跟PRV阳性血清均有较好的反应性。两个蛋白经初步包被检测对比后,选择gB-M蛋白作为方法建立的抗原蛋白,并初步建立出gB-M抗原ELISA金测方法,通过检测IDEXX-PRV-gB试剂盒检测过的226份阴阳性血清,发现该方法与IDEXX-PRV-gB试剂盒的整体符合率、特异性和敏感性分别为80.1%、91.9%、72.9%,其中检测的64份母猪阳性血清的符合率高达95.3%,检测的74份小猪阳性血清符合率只有53.9%。通过与IDEXX-PRV-gB试剂盒在母猪血清检测方面的对比实验,发现该方法更能明显区分个体间gB抗体水平的差异,比IDEXX-PRV-gB试剂盒更适合于母猪免疫效果评估。针对于该方法检测小猪阳性血清符合率不高的情况,笔者认为是原核表达系统所表达的gB蛋白的糖基化修饰不够充分,造成其敏感性不高的原因所导致。