四溴双酚-A与DNA的相互作用及其毒性研究

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环境中许多化学污染物在生物体代谢过程中会导致DNA分子的损伤,而污染物与DNA作用形成的DNA加合物是DNA化学损伤的最普遍形式,它反映了污染物与DNA的作用,可以用来评价和预测化合物的潜在致癌性。目前因四溴双酚-A(TBBPA)的大量使用,已经在空气、土壤、水体底泥、海鸟和鱼体内,甚至人体血液和母乳等多种环境介质和生物样品中已经发现TBBPA的存在。由于1-氨基芘(1-AP)与DNA作用能形成加合物已经得到公认,因此本研究拟分别以1-氨基芘和四溴双酚-A为目标物,以pUC18质粒DNA作为实验材料,采用DNA凝胶电泳和光谱的方法,研究两种物质1-氨基芘和四溴双酚-A与DNA的作用和对DNA的损伤。本论文分别研究了1-AP、TBBP-A与DNA在四个体系中的相互作用,实验工作主要包括4部分:(1)1-AP、TBBP-A与DNA的直接作用研究:1-AP与DNA在直接作用时的电泳图像及紫外图谱证明并未发生结合,在相同条件下研究TBBP-A与DNA直接混合,结果表明TBBP-A对DNA在直接作用下不会造成损伤。(2)1-AP、TBBP-A与DNA在氙灯光照情况下的相互作用研究:当1-AP与DNA在混合后置于光照条件下时,光照后的样品的电泳图像有明显的损伤趋势,且紫外叠加图也同时证明两者发生作用。在相同条件下研究TBBP-A与DNA混合后进行光照,电泳图像也发生明显的损伤趋势并且伴随着紫外图谱的变化,得到TBBP-A与DNA也发生相互作用的结论。(3)1-AP、TBBP-A与DNA在Fenton产自由基系统中的相互作用研究:在Fenton产羟基自由基系统中,1-AP与DNA混合的电泳图像有明显的损伤趋势,且改变1-AP、DNA与Fe2+的反应比例,其对DNA的损伤结果也会发生变化,当实验中加入Fe2+达到300μL时,1-AP对DNA的损伤达到半数,当加入量增加到5001μL时DNA被完全损伤;同理可得出改变TBBP-A、DNA与Fe2+的反应比例,对DNA的损伤结果发生变化,且TBBP-A对DNA的损伤结果随着Fe2+加入量的增多呈线性相关。(4)1-AP、TBBP-A与DNA在S9肝微粒体酶的酶系统中的相互作用研究:在模拟体内代谢系统的S9肝微粒体酶混合液中,1-AP与DNA发生相互作用。改变1-AP (TBBP-A)、DNA与S9混合液的反应比例,得到的毒物对DNA的损伤剂量也发生变化。随着S9加入量的增多,受损伤的DNA的量变大,呈线性相关。当TBBP-A与DNA在S9肝微粒体酶酶系统模拟体内实验时,也出现和1-AP与DNA相互作用时比较吻合的结果。
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