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第一部分:糖基化终末产物通过调控Treg细胞转化促2型糖尿病亚临床动脉粥样硬化发生目的:研究AGEs对2型糖尿病患者动脉粥样硬化发生中的作用,探究AGEs对T细胞亚群数量和功能的影响。方法:选取糖尿病患者50例,应用彩色多普勒超声法检查患者颈动脉,将IMT≥1mm的患者归为糖尿病亚临床动脉粥样硬化组(T2D+sub AS组),IMT<1mm的患者为糖尿病非亚临床动脉粥样硬化组(T2D+non-sub AS组),同时纳入50例同期体检的健康人作为正常对照组,抽取受试对象外周血,分析上述研究对象外周血中AGEs、RAGE和T淋巴细胞亚群的水平,进一步,构建T2D大鼠模型,在临床水平和动物水平探讨AGEs对T淋巴细胞亚群数量和表型的影响。结果:T2D+subAS患者外周血中AGEs和RAGE的水平显著高于T2D+non-subAS组患者及健康对照,T2D+sub AS患者的CD4+T细胞较T2D+non-sub AS患者及健康对照显著升高,CD4+CD25+T细胞亚群的比例降低,且出现CD4+/CD8+比例失衡。Pearson相关分析结果显示,AGEs与CD4+T细胞呈显著正相关,与CD8+T细胞、CD4+CD25+T细胞呈负相关。进一步研究发现,与健康对照相比,T2D+non-sub AS患者外周血中Treg细胞的比例显著降低,且在T2D+sub AS患者中进一步降低;有意义的是,AGEs水平与Treg比例呈显著负相关。在T2D大鼠血清中,AGEs水平显著升高,而Treg细胞比例降低;使用RAGE中和抗体干预后可显著逆转AGEs水平的升高和Treg细胞比例的降低。结论:T2D+sub AS患者中AGEs和RAGE浓度显著升高,AGEs与RAGE结合后启动体内免疫反应,引起免疫失衡,导致Treg细胞比例降低,阻断AGEs-RAGE通路可显著逆转上述病理改变。第二部分:糖基化终末产物通过激活PI3K-AKT-m TOR通路诱导Treg细胞转化目的:研究AGEs-RAGE对Treg细胞表型的影响,并探讨其中的具体机制。方法:纳入50例空腹血糖正常、餐后2小时血糖正常且无颈动脉粥样硬化的健康对照,抽取受试对象外周血并分离Treg细胞,AGEs处理后分析细胞表型的改变,并分析RAGE下游的具体作用信号通路。结果:与对照组相比,Treg细胞在AGEs处理后IFN–γ阳性的细胞比例增加,同时,Th1型细胞亚群的特征基因Cxcr3、Ccr5和T-bet的表达增加,Treg细胞的特征基因Cd25和Gitr3表达减低。AGEs可显著上调Treg细胞中RAGE基因和蛋白的表达,使用s RAGE阻断AGEs-RAGE通路后,可显著逆转AGEs对Treg细胞表型的影响。进一步研究发现,AGEs处理Treg细胞主要是通过激活RAGE下游的PI3K-Akt-m TOR信号通路来发挥其调控细胞表型调控的作用,使用该信号通路的抑制剂可显著阻断AGEs的上述效应。结论:AGEs可以显著激活Treg细胞RAGE下游的PI3K-AKT-m TOR信号通路,调控Treg细胞转化为Th1/Treg细胞亚群,而使用该信号通路的抑制剂可明显逆转AGEs对Treg细胞的调控作用。