原发性高血压患者血清FGF21水平检测和FGF21基因载体的构建及表达

来源 :贵阳医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rr2009
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目的:  1.检测原发性高血压患者血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平,初步探讨FGF21与原发性高血压的相关性。  2.构建人和小鼠FGF21表达载体,并在大肠杆菌中表达,纯化后获得小鼠和人的FGF21融合蛋白。为后期动物实验作准备。  方法:  1.实验对象分为三组,原发性高血压伴动脉粥样硬化组(n=10)、原发性高血压非动脉粥样硬化组(n=20),正常对照组(n=30)。采用酶法测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,血清FGF21、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平采用酶联免疫法测定。  2.分别从人和小鼠肝脏提取总RNA后,经RT-PCR扩增获得目的片段,构建其T载体进行保存。以T载体为模板,扩增FGF21 mat-peptide,连接至pGEX-4T-3、 pET-28a(+)表达载体中,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-3-MFGF21、pET-28a(+)-MFGF21、pGEX-4T-3-HFGF21、 pET-28a(+)-HFGF21。将各重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳以鉴定是否为可溶性表达,采用亲和层析法纯化各表达产物后,进行Western blotting鉴定。  结果:  1.原发性高血压伴动脉粥样硬化组、原发性高血压非动脉粥样硬化组血清FGF21、ox-LDL、TG水平均明显高于对照组(P<0.05);线性相关分析显示血清FGF21水平与ox-LDL、TG均呈正相关。  2.成功构建重组质粒 pGEX-4T-3-MFGF21、 pET-28a(+)-MFGF21、pGEX-4T-3-HFGF21、 pET-28a(+)-HFGF21。可溶性表达后成功纯化出GST-MFGF21、his-MFGF21、GST-HFGF21、his-HFGF21,经Western-blotting鉴定为目的蛋白。  结论:  1. FGF21与原发性高血压存在一定相关性。  2.成功构建并可溶性表达 pGEX-4T-3-MFGF21、pET28a(+)-MFGF21、pGEX-4T-3-HFGF21、pET28a(+)-HFGF21,获得GST-MFGF21、his-MFGF21、GST-HFGF21、his-HFGF21蛋白。
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