人附睾分泌蛋白4(human epididymis protein 4,HE4),最初,被认为是附睾中独有的表达产物,后来发现HE4在浆液性和子宫内膜样上皮性卵巢癌患者中过表达。据报道,HE4显著增强卵巢癌细胞的侵袭和转移能力,这与HE4上Lewis y抗原的高表达相关联。研究表明大多数肺癌高表达HE4蛋白,与肺癌病人的预后不良有关,但HE4在肺癌中的恶性转化机制尚不清楚。另有研究发现Lewis y抗原同样存在于表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR),高表达的Lewis y抗原增强EGFR磷酸化,并激活PI3K/AKT和RAF/MEK/MAPK信号通路,促使细胞增殖。而突变的EGFR是肺癌主要的诊断与治疗分子靶标,因此我们推测肺癌中高表达的HE4可能与EGFR信号通路有一定的相关性。通过本课题的研究,有望阐明HE4在肺癌发生和转移中的作用机制,并对肺癌的靶向治疗有可能提供一种新的治疗策略,具有重要的临床价值。本文采用Western Blotting分析了HE4在六种类型的肿瘤细胞株中的表达。利用RNA干扰技术(慢病毒介导的sh RNA)在三株具有代表意义的肺癌细胞株[PC-9(EGFR 19外显子缺失突变,对EGFR一二代抑制剂敏感)、H1975(EGFR二次点突变T790M,对EGFR一二代抑制剂具有显著耐药性)和A549(EGFR野生型,对EGFR抑制剂敏感性不高)]敲低HE4表达,检测敲低HE4后对肺癌细胞表型的影响,主要包括细胞增殖、克隆形成、周期、凋亡、转移和侵袭;其次检测了HE4敲低是否增敏靶向EGFR一线药物吉非替尼(gefitinib)在肺癌细胞增殖中的药效;最后通过q RT-PCR、免疫共沉淀及Western Blotting检测HE4与EGFR的转录调控、互作及敲低HE4后对EGFR相关信号通路的影响。结果表明HE4在肺癌、间皮瘤、卵巢癌、胃癌、结直肠癌和胃肠道间质瘤中均有不同程度表达;TCGA数据库分析发现与正常癌旁组织相比,HE4在肺腺癌病人中高表达,而在肺鳞癌中表达差异并不显著;体外实验表明在肺腺癌细胞株PC-9和H1975中敲低HE4失活了EGFR信号通路,从而显著抑制细胞的生长、克隆形成、伤口愈合、侵袭以及阻滞细胞于G1期;gefitinib与HE4 sh RNA对肺腺癌细胞的生长不具有协同性抑制效果;进一步研究发现肺腺癌细胞中HE4在两个层面调控EGFR表达:1)转录水平调节EGFR m RNA表达;2)HE4与EGFR存在蛋白互作。这些新的发现将对肺癌的治疗具有重要的临床意义,药物靶向HE4也可能成为一种新的肺癌治疗策略。