[目的]探究TGF-β1调控的miRNA在横纹肌肉瘤（rhabdomyosarcoma,RMS）肌分化阻滞中的作用和分子机制,为低分化横纹肌肉瘤患者的治疗筛选有希望的分子靶标。首先在横纹肌肉瘤RD细胞株中抑制TGF-β1表达后,选取在miRNAs表达芯片中上调的miRNA作为研究对象,分析TGF-β1调控的miRNA表达量对横纹肌肉瘤肌分化的影响。再利用JASPAR数据库预测SMAD2与TGF-β1依赖的pri-miR-493启动子区域的结合位点,通过染色质免疫共沉淀技术（ChIP）,检测SMAD2与pri-miR-493启动子区域结合状态及强度。再通过小分子药物SB431542阻断TGF-β1及其下游SMAD2信号通路,通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及 Western blot（WB）检测 miR-493-5p 的基因表达水平及 SMAD2、pSMAD2的蛋白表达水平。进一步利用公共生物信息学数据库,通过靶基因预测软件和信号通路数据库分析,筛选可能受miR-493-5p调控的下游靶基因,在RD细胞中通过qRT-PCR验证miR-493-5p对靶基因及肌分化指标的影响。最后,收集横纹肌肉瘤患者临床病理标本,通过免疫组化技术分析肿瘤组织中miR-493-5p靶基因与肌分化指标的表达相关性。[结果]抑制体外培养的RD细胞TGF-β1表达后,miRNA表达芯片筛选出TGF-β1依赖的miRNA中以miR-493-5p表达量的增加最明显,且miR-493-5p的表达与横纹肌肉瘤细胞肌分化指标的表达量呈正相关。ChIP结果显示在RD细胞中,转录因子SMAD2可与pri-miR-493启动子区域结合并抑制其转录,而在SMAD2表达抑制的RD细胞株中,其结合能力及抑制作用减弱。通过TGF-β1/SMAD2信号通路的小分子抑制剂SB431542干扰信号通路的激活后,SMAD2的磷酸化水平降低,而受其调控的miR-493-5p表达量明显增加。进一步通过生物信息学技术对miR-493-5p相关信号通路进行分析,筛选并验证了 Pescadillo核糖体生物发生因子1（PES1）为miR-493-5p的靶基因。在RD细胞中,通过对肌分化指标（MyoD1、Myogenin、Myosin及Desmin）的RNA及蛋白表达水平检测发现,PES1对RD细胞肌分化有显著的抑制作用。在横纹肌肉瘤的病理组织中进行免疫组化分析,结果显示PES1高表达组的肌分化指标（MyoD 1、Myogenin及Desmin）阳性率明显低于PES1低表达组,从而在病理组织中验证了 PES1与横纹肌肉瘤肌分化阻滞的相关性。[结论]在横纹肌肉瘤肌分化阻滞的机制中,TGF-β1促进下游SMAD2的表达,高表达的SMAD2通过抑制pri-miR-493的转录导致miR-493-5p的合成减少,使miR-493-5p对下游靶基因PES1的抑制作用减弱,从而导致横纹肌肉瘤细胞中PES1的表达增加,抑制了横纹肌肉瘤细胞的肌分化指标的表达。