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在哺乳动物的卵巢上,囊腔形成初期的卵泡称为早期有腔卵泡(Early antral follicles,EAFs)。绝大多数的卵泡在早期有腔卵泡阶段会发生闭锁退化,这造成了丰富而优质卵母细胞资源的极大浪费。颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的主要诱因。1-磷酸鞘氨醇(Sphingosine-1-phosphate,S1P)是细胞内鞘脂代谢的产物,可促进多种细胞存活和增殖,抑制细胞凋亡,然而关于S1P对卵泡发育的研究却少有报道。本论文研究以猪EAFs为研究对象,研究S1P对猪EAFs颗粒细胞(Granulosa cells derived from early antral follicles,EAF-GCs)的影响,为优化卵泡体外培养体系提供理论基础。试验一:通过ELISA法比较了健康和闭锁EAF-GCs中S1P的浓度,采用免疫组化染色检测了 1-磷酸鞘氨醇受体 1(Sphingosine-1-phosphate receptor 1,S1PR1)在猪卵巢上的定位。结果表明,健康EAF-GCs中的S1P浓度显著高于闭锁EAFs(P<0.05)。此外,S1PR1在猪原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和有腔卵泡的卵母细胞、颗粒细胞及鞘膜细胞上均有表达。试验二:通过MTT比色法检测了不同浓度S1P(10 nmol/L、100 nmol/L、1μmol/L)对EAF-GCs增殖的影响。结果发现,不同浓度的S1P作用48 h均能显著促进EAF-GCs增殖(P<0.05),其中以100 nmol/LSlP作用最为显著。试验三:体外培养EAF-GCs,分别添加100nmol/L的S1P、鞘氨醇激酶(S1P合成路径的关键酶)抑制剂N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)或S1P+DMS处理48 h,通过流式细胞术、ELISA和RT-qPCR检测S1P对EAF-GCs凋亡、类固醇激素合成和血管发生相关基因表达的影响。结果显示,S1P对EAF-GCs凋亡率没有显著影响。S1P能促进E2生成,并显著上调E2和P4浓度的比值(P<0.05),表明S1P参与调节类固醇激素合成。S1P组血管内皮生长因子VEGFA mRNA水平显著低于对照组和DMS组(P<0.05)。结论:健康EAFs的颗粒细胞中S1P浓度显著高于闭锁EAFs;S1PR1在猪的各级卵泡的卵母细胞、颗粒细胞和鞘膜细胞上均有表达;S1P能够显著促进EAF-GCs增殖,对EAF-GCs凋亡没有显著影响;S1P能够调节EAF-GCs的类固醇激素合成,抑制卵泡内的血管发生。