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背景：
肺癌仍是全球范围内死亡率最高的恶性肿瘤[1,2]。肺癌5年生存率约为18.6%[3]，预后较前改善，主要归因于早期诊断及有效治疗策略的不断发展。当前，以吉非替尼、厄罗替尼等为代表的EGFR-TKIs(EpithelialGrowthFactorReceptors-TyrosineKinaseInhibitors，表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂)可显著延长EGFR敏感突变的非小细胞肺癌患者的无进展生存期、提高生存质量；然而，中位治疗时间9-13月[4-7]后患者可出现获得性耐药[8]、导致疾病进展，严重影响了非小细胞肺癌靶向治疗的效果。目前，针对非小细胞肺癌EGFR-TKIs分子靶向药物获得性耐药的机制研究已经成为热点，诸多研究试图从不同方向阐述获得性耐药发生的机制，进而为肺癌的基础研究与临床治疗提供新的思路。FGFR1是一种酪氨酸激酶受体，促进多种肿瘤细胞的发生、发展；其过表达亦参与调控非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药，但具体作用机制尚不十分明确。
目的：
本课题旨在阐明人非小细胞肺癌(肺腺癌)细胞HCC827厄罗替尼耐药后FGFR1的表达水平，并探讨FGFR1抑制剂PD173074对肿瘤细胞厄罗替尼耐药的影响。进而课题研究HCC827细胞厄罗替尼耐药前后自噬水平的变化，以及PD173074在调控耐药肿瘤细胞自噬的作用。
方法：
本课题通过剂量递增反复刺激诱导法构建了人肺腺癌细胞HCC827厄罗替尼的耐药细胞株(HCC827/ER)；应用CCK-8法检测细胞增殖能力；PEAnnexinV/7-AAD双染色法及流式细胞学分析测定细胞凋亡率；RT-qPCR以检测细胞耐药前后FGFR1mRNA表达差异；WesternBlot检测FGFR1蛋白及自噬标志物(包括p62、LC-3)含量。
结果：
1.各细胞株与厄罗替尼共培养后行CCK-8法示，厄罗替尼耐药细胞株HCC827/ER培养96h后细胞OD值为HCC827细胞的1.81倍(p＜0.001)。流式细胞学分析示，HCC827/ER细胞凋亡率低于HCC827细胞(13.3%vs28.9%，p＜0.0001)。RT-qPCR及WesternBlot结果示，与HCC827细胞相比，厄罗替尼耐药细胞株HCC827/ER中FGFR1在mRNA及蛋白水平均表达升高(相对mRNA表达量4.31vs1，p＜0.0001；相对灰度值1.12vs0.5，p＜0.0001)。此结果提示FGFR1在HCC827细胞厄罗替尼耐药中可能发挥重要作用。
2.为研究FGFR1对厄罗替尼耐药细胞株HCC827/ER的影响，课题将HCC827/ER、HCC827细胞与厄罗替尼、FGFR1抑制剂PD173074共培养，并行CCK-8法检测示，应用PD173074后HCC827/ER细胞OD值较应用前降低(p＜0.001)。流式细胞学分析示PD173074应用后HCC827/ER凋亡较前增多(19.5%vs13.3%，p=0.0002)。结果提示FGFR1抑制剂PD173074对HCC827细胞厄罗替尼耐药后存在增敏作用。
3.厄罗替尼耐药细胞株HCC827/ER中细胞自噬相关标志物LC3-Ⅱ较HCC827降低(相对灰度值0.1971vs0.2535，p＜0.0001)、p62升高(相对灰度值0.1205vs0.1129，p＜0.0001)。而经PD173074处理后，HCC827/ER中LC3-Ⅱ较处理前升高(相对灰度值0.2167vs0.1971，p＜0.001)，p62较前降低(相对灰度值0.0866vs0.1205，p＜0.0001)。
4.HCC827/ER与厄罗替尼、PD173074共培养体系中加入自噬抑制剂HCQ，以观察抑制自噬后PD173074对HCC827/ER细胞增殖及凋亡的影响。CCK-8法示，自噬抑制后HCC827/EROD值为抑制前的1.36倍(p=0.013)，即PD173074对HCC827/ER增殖的抑制作用减弱；流式细胞学分析提示抑制自噬后HCC827/ER细胞凋亡率较抑制前减弱(17.6%vs19.5%，p=0.0257)。以上结果提示自噬抑制后可逆转PD173074对HCC827细胞厄罗替尼耐药后的增敏作用。
结论：
HCC827细胞厄罗替尼耐药后，FGFR1表达升高、细胞自噬下调；而FGFR1抑制剂PD173074可重新诱导肿瘤细胞自噬，从而逆转HCC827细胞对厄罗替尼耐药。FGFR1作为旁路激活是厄罗替尼获得性耐药的机制之一；同时应用厄罗替尼及FGFR1抑制剂可改善EGFR-TKIs耐药。
肺癌仍是全球范围内死亡率最高的恶性肿瘤[1,2]。肺癌5年生存率约为18.6%[3]，预后较前改善，主要归因于早期诊断及有效治疗策略的不断发展。当前，以吉非替尼、厄罗替尼等为代表的EGFR-TKIs(EpithelialGrowthFactorReceptors-TyrosineKinaseInhibitors，表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂)可显著延长EGFR敏感突变的非小细胞肺癌患者的无进展生存期、提高生存质量；然而，中位治疗时间9-13月[4-7]后患者可出现获得性耐药[8]、导致疾病进展，严重影响了非小细胞肺癌靶向治疗的效果。目前，针对非小细胞肺癌EGFR-TKIs分子靶向药物获得性耐药的机制研究已经成为热点，诸多研究试图从不同方向阐述获得性耐药发生的机制，进而为肺癌的基础研究与临床治疗提供新的思路。FGFR1是一种酪氨酸激酶受体，促进多种肿瘤细胞的发生、发展；其过表达亦参与调控非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药，但具体作用机制尚不十分明确。
目的：
本课题旨在阐明人非小细胞肺癌(肺腺癌)细胞HCC827厄罗替尼耐药后FGFR1的表达水平，并探讨FGFR1抑制剂PD173074对肿瘤细胞厄罗替尼耐药的影响。进而课题研究HCC827细胞厄罗替尼耐药前后自噬水平的变化，以及PD173074在调控耐药肿瘤细胞自噬的作用。
方法：
本课题通过剂量递增反复刺激诱导法构建了人肺腺癌细胞HCC827厄罗替尼的耐药细胞株(HCC827/ER)；应用CCK-8法检测细胞增殖能力；PEAnnexinV/7-AAD双染色法及流式细胞学分析测定细胞凋亡率；RT-qPCR以检测细胞耐药前后FGFR1mRNA表达差异；WesternBlot检测FGFR1蛋白及自噬标志物(包括p62、LC-3)含量。
结果：
1.各细胞株与厄罗替尼共培养后行CCK-8法示，厄罗替尼耐药细胞株HCC827/ER培养96h后细胞OD值为HCC827细胞的1.81倍(p＜0.001)。流式细胞学分析示，HCC827/ER细胞凋亡率低于HCC827细胞(13.3%vs28.9%，p＜0.0001)。RT-qPCR及WesternBlot结果示，与HCC827细胞相比，厄罗替尼耐药细胞株HCC827/ER中FGFR1在mRNA及蛋白水平均表达升高(相对mRNA表达量4.31vs1，p＜0.0001；相对灰度值1.12vs0.5，p＜0.0001)。此结果提示FGFR1在HCC827细胞厄罗替尼耐药中可能发挥重要作用。
2.为研究FGFR1对厄罗替尼耐药细胞株HCC827/ER的影响，课题将HCC827/ER、HCC827细胞与厄罗替尼、FGFR1抑制剂PD173074共培养，并行CCK-8法检测示，应用PD173074后HCC827/ER细胞OD值较应用前降低(p＜0.001)。流式细胞学分析示PD173074应用后HCC827/ER凋亡较前增多(19.5%vs13.3%，p=0.0002)。结果提示FGFR1抑制剂PD173074对HCC827细胞厄罗替尼耐药后存在增敏作用。
3.厄罗替尼耐药细胞株HCC827/ER中细胞自噬相关标志物LC3-Ⅱ较HCC827降低(相对灰度值0.1971vs0.2535，p＜0.0001)、p62升高(相对灰度值0.1205vs0.1129，p＜0.0001)。而经PD173074处理后，HCC827/ER中LC3-Ⅱ较处理前升高(相对灰度值0.2167vs0.1971，p＜0.001)，p62较前降低(相对灰度值0.0866vs0.1205，p＜0.0001)。
4.HCC827/ER与厄罗替尼、PD173074共培养体系中加入自噬抑制剂HCQ，以观察抑制自噬后PD173074对HCC827/ER细胞增殖及凋亡的影响。CCK-8法示，自噬抑制后HCC827/EROD值为抑制前的1.36倍(p=0.013)，即PD173074对HCC827/ER增殖的抑制作用减弱；流式细胞学分析提示抑制自噬后HCC827/ER细胞凋亡率较抑制前减弱(17.6%vs19.5%，p=0.0257)。以上结果提示自噬抑制后可逆转PD173074对HCC827细胞厄罗替尼耐药后的增敏作用。
结论：
HCC827细胞厄罗替尼耐药后，FGFR1表达升高、细胞自噬下调；而FGFR1抑制剂PD173074可重新诱导肿瘤细胞自噬，从而逆转HCC827细胞对厄罗替尼耐药。FGFR1作为旁路激活是厄罗替尼获得性耐药的机制之一；同时应用厄罗替尼及FGFR1抑制剂可改善EGFR-TKIs耐药。