叠氮溴化丙锭（propidium monoazide, PMA）为一种新型的核酸结合染料，可以穿过受损的细胞膜进入细胞内。在可见光（最大吸收峰为460nm）的作用下，PMA可同DNA发生共价交联反应。活细胞具有完整的细胞膜结构，可以将DNA结合染料排除在外，而死细胞和膜损伤细胞则不能。通过这种方法，最终使死亡细胞中的DNA在核酸纯化中被选择性的剔除。本文探讨了将叠氮溴化丙锭与定量PCR（quantitive polymerase chain reaction, qPCR）技术结合，用于检测膜损伤菌背景条件下的大肠杆菌活菌的方法。实验表明：5min以上的强烈光照可以使PMA与DNA共价交联，同时完全钝化游离的PMA以避免“假阴性”结果；抑制死菌DNA扩增的最低PMA浓度为10μg/mL，不抑制活菌DNA扩增的最高PMA浓度为20μg/mL。当活菌/总菌＞1%时，经PMA预处理,可以消除膜损伤菌DNA的干扰，实现对活菌的定量检测。实验选取了三种不同的非热杀菌技术，利用工业常用的处理条件对菌液进行灭菌处理，然后用PMA-qPCR方法和平板计数分别对灭菌效果进行检测，讨论PMA-qPCR方法的适用性问题。实验说明该方法可用于监测超高压处理、超声波处理以及高压脉冲电场的灭菌效果，PMA-qPCR的Ct值与lgCFU之间呈现良好的线性关系。细菌灭活方式对PMA-qPCR活菌定量结果的准确性与重要的影响。将PMA-qPCR方法用于检测不同因素对超声波灭菌效率的影响，表明在温度和超声频率一定的条件下，处理时间和功率对灭菌效率的影响比较明显，而占空比对其影响较小。最后，实验模拟了两种代表性的环境：1.含有非目标微生物的复杂样本，选取革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌各一株，与大肠杆菌培养液按比例进行混合；2.人工污染目标菌的食品样本。对这两种样本的定量检测结果与平板计数结果无显著差异，非目标微生物及普通食品组分对检测结果无影响，证明该PMA-qPCR方法在实际应用中将会有较为广阔的应用前景。PMA预处理易于操作，可以有效去除膜不完整细胞的DNA。实验证明PMA-qPCR方法可用于定量检测复杂样本中的活菌数量。