lncRNA GHET1的表达对胶质瘤细胞活性的影响研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:linuxlovermm5
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[目的]通过体外实验研究长链非编码RNA GHET1在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤生物学活性的影响,明确长链非编码RNA GHET1在胶质瘤中的作用,为胶质瘤的临床治疗提供新的思路和方法。[方法]1.将临床收集到的30例胶质瘤组织及2例正常脑组织标本进行HE染色对比其细胞数量及形态差异。经常规脱水、浸蜡、包埋、切片,并进行原位杂交实验,检测肿瘤组织与正常组织中lncRNAGHET1的表达。对石蜡切片进行免疫组织化学实验,检测Numb蛋白的表达。2.将胶质瘤细胞系LN229和U87细胞在加入10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中进行培养并传代。用脂质体转染法对细胞进行转染,再将转染成功的LN229和U87细胞分别分为阴性对照组(NC)组、空白对照(BL)组和GHET1-shRNA组3组。3.将不同组的LN229或U87细胞以2X 103细胞/孔的形式接种于96孔板上,采用MTT法测定各组LN229、U87细胞的增殖率。4.将不同组的LN229或U87细胞以4×105个/孔的形式接种于6孔板上,采用流式细胞术检测细胞凋亡。5.采用流式细胞术检测各组LN229、U87细胞的细胞周期。6.LN229和U87细胞转染48小时后,调整细胞密度为2×105个/ml,通过transwell法检测各组细胞的细胞侵袭性。7.将各组LN229或U87细胞按2.0× 106个/孔接种于6孔板中,置于细胞培养箱中,待细胞粘连形成均匀单层后,划伤,继续培养48小时后再次拍照记录创面愈合情况,通过划痕实验检测各组细胞的迁移能力。[结果]1.通过HE染色,癌组织标本周围的细胞浸润较正常组织标本明显增多;2.原位杂交法(ISH)检测肿瘤组织lncRNAGHET1表达较正常组织明显上调(P<0.05);3.免疫组化法检测癌组织Numb蛋白表达较正常组织明显下调(P<0.05);4.胶质瘤细胞系LN229和U87的GHET1-shRNA组细胞增殖率较对照组明显降低(P<0.05),差异有统计学意义;5.胶质瘤细胞系LN229和U87的GHET1-shRNA组细胞凋亡率较对照组明显增高(P<0.05),差异有统计学意义;6.胶质瘤细胞系LN229和U87各组的细胞周期对比,GHET1-shRNA组G1期较NC组和BL组明显延长(P<0.05),差异有统计学意义。NC组和BL组相比细胞周期无显著差异(P<0.05);7.胶质瘤细胞系LN229和U87的GHET1-shRNA组细胞侵袭数较对照组明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。[结论]1.胶质瘤组织标本中lncRNA GHET1的表达明显高于正常脑组织。2.下调lncRNA GHET1的表达可抑制胶质瘤细胞活性,促进凋亡,使细胞周期在G1期阻滞,抑制胶质瘤细胞的增殖和迁移,降低其侵袭能力。
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