【摘 要】
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目的本研究在A375、A2058、WM-266-4等人源黑色素瘤细胞系中,建立沉默表达和过表达分化抑制因子3（Inhibitor of differentiation 3,ID3）的体外肿瘤模型,探究ID3对黑色素瘤细胞增殖、侵袭、迁移和上皮-间充质转化EMT（Epithelialmesenchymaltransition,EMT）的作用。方法选择人源黑色素瘤细胞系（A375、A2058、WM-2
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目的本研究在A375、A2058、WM-266-4等人源黑色素瘤细胞系中,建立沉默表达和过表达分化抑制因子3（Inhibitor of differentiation 3,ID3）的体外肿瘤模型,探究ID3对黑色素瘤细胞增殖、侵袭、迁移和上皮-间充质转化EMT（Epithelialmesenchymaltransition,EMT）的作用。方法选择人源黑色素瘤细胞系（A375、A2058、WM-266-4）,实时荧光定量PCR法检测细胞中ID3 m RNA的表达,进一步地,构建ID3过表达载体质粒并设计靶向抑制ID3的si RNA,采用瞬时转染的方法转染黑色素瘤细胞,将其分为4组（NC、si-ID3、Vector、ID3）,Western Blot法和实时荧光定量PCR法检测转染48h后的转染效率。通过细胞划痕实验检测细胞的迁移能力;采用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力;利用Western Blot法检测细胞中EMT相关蛋白Ecadherin,Vimentin的表达;通过CCK-8实验检测细胞的增殖能力。结果Western Blot以及q RT-PCR结果分别显示与阴性对照组相比,si-ID3组黑色素瘤A375细胞中ID3的蛋白表达降低（P＜0.01）,ID3的m RNA表达水平也呈下调趋势（P＜0.05）,表明细胞转染成功。Transwell侵袭实验表明ID3过表达能够明显促进黑色素瘤细胞的侵袭能力（P＜0.001）,而si-ID3显著抑制黑色素瘤细胞的侵袭能力（P＜0.01）。细胞划痕实验表明ID3过表达能够显著促进黑色素瘤细胞的迁移能力（P＜0.01）,而si-ID3则明显抑制肿瘤细胞的迁移（P＜0.0001）。表明在黑色素瘤细胞中ID3能够促进细胞的迁移和侵袭（P＜0.0001或P＜0.01）。进一步地,Western Blot实验表明,过表达ID3能够促进波形蛋白Vimentin的蛋白表达,抑制E-cadherin的蛋白表达,而沉默表达ID3能够抑制波形蛋白Vimentin的蛋白表达,促进E-cadherin的蛋白表达,表明ID3能够促进黑色素瘤细胞的上皮间质转化（EMT）。此外,CCK-8结果显示ID3的表达对黑色素瘤细胞增殖没有明显影响,说明ID3不影响黑色素瘤细胞的增殖。结论过表达ID3促进而沉默表达ID3抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭;过表达ID3促进而沉默表达ID3抑制黑色素瘤细胞EMT转化;然而,ID3的表达对细胞增殖无显著影响。
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