人类心脏发育候选新基因hnulp1的克隆与功能研究

来源 :湖南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lbwang2009
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碱性螺旋-环-螺旋蛋白(basic helix-loop-helix,bHLH)是真核生物中的一种特殊的转录因子,它们在神经发生、肌细胞发生、心脏发育和血细胞发生、癌症发生过程中发挥着重要的调节作用。hnu1p1就是本文作者在利用生物信息学方法筛选人类心脏发育候选基因的过程中发现的一个人类新基因。其cDNA全长2270个碱基,ORF全长2031个碱基,编码一个长676个氨基酸残基的蛋白质。该蛋白包含一个bHLH和一个功能未知命名为DUF654的结构域。在小鼠等物种中均发现了它的同源蛋白,并且它们之间具有极高的保守度,说明此蛋白所在的亚家族可能具有相当重要的功能。组织表达分析表明该基因在胚胎和成体中有不同的表达模式,且在成体心脏组织中有较高水平的表达。荧光素酶报道基因信号途径分析表明,该蛋白作为一个转录抑制子对SRF信号途径起着极强的抑制作用,并且该抑制作用通过新的未被鉴定功能的DUF654结构域表现出来。这些结果预示着人类bHLH转录因子HNULP1在心脏发育的晚期通过SRF信号途径对心脏发育起着重要的调控作用。   同时,我们还通过酵母双杂交实验筛选到人类心脏特异性表达基因FHL2作为HNULP1的相互作用侯选蛋白。随后,我们通过免疫共沉淀技术证明了其在细胞内的相互作用。荧光共定位实验结果表明HNULP1与FHL2共定位于细胞质与细胞核中。荧光素酶报道基因分析表明FHL2对HNULP1的转录活性起到负调控作用。该实验结果为进一步研究HNULP1在心脏发育中的功能,以及FHL2与HNULP1的相互作用模式打下了基础。
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