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目的:本课题以课题组前期研究为基础,通过转染miR-21 inhibitor下调大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)内miR-21的水平,观察miR-21对脂多糖(lipopolysaccharide LPS)诱导的NR8383细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,探讨miR-21对LPS诱导的NR8383细胞炎症反应的调控机制。方法:1)选用NR8383细胞作为研究对象,分别转染10 n M、20 n M、40 n M浓度的FAM labeled micro RNA Negative Control 24小时,免疫荧光检测miRNA的转染效率,选取转染效率最佳的浓度做为后续实验的转染浓度。2)用20 n M浓度的miR-21 inhibitor和negative control分别转染NR8383细胞24小时,RT-q PCR检测细胞内miR-21及PTEN m RNA表达水平,western blot检测细胞内PTEN蛋白的表达水平。3)将体外培养的NR8383细胞分为两组,分别转染20 n M的miR-21 inhibitor和negative control 24小时,然后给予终浓度为1μg/ml的LPS刺激NR8383细胞6小时,分别收集细胞及细胞培养上清液;采用western blot检测两组细胞中p-AKT蛋白的表达情况;采用免疫荧光检测两组细胞内NF-κB的活化情况;采用RT-q PCR检测两组细胞内TNF-αm RNA表达水平;采用酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测两组细胞培养上清中TNF-α蛋白的表达情况。结果:1)分别用10 n M、20 n M、40 n M浓度的FAM labeled miRNA Negative Control转染NR8383细胞24小时后,免疫荧光观察转染效率发现20 n M时,转染效率最高,大约为90%。因此选择20n M作为后续实验的转染浓度。2)与NC转染组比较,miR-21 inhibitor转染组细胞内miR-21表达水平下降至0.34±0.08倍(p<0.05),PTEN m RNA的表达升高2.24±0.48倍(p<0.05),PTEN蛋白升高3.47±0.98倍(p<0.05)。3)LPS刺激两组细胞6小时后,与NC转染组比较,miR-21 inhibitor转染组细胞内p-AKT蛋白的表达下降至0.19±0.11倍(p<0.05),同时NF-κB的核移位明显减少。细胞培养上清液中TNF-α蛋白的表达由(2760.50±302.80)pg/ml下降至(922.88±68.58)pg/ml,下降至0.34±0.04倍(p<0.05);细胞内TNF-αm RNA表达水平下降至0.34±0.78倍(p<0.05)。结论:1)下调miR-21可以抑制LPS诱导的NR8383肺泡巨噬细胞TNF-α的表达。2)下调miR-21后可能通过抑制LPS诱导的PTEN/AKT信号通路及NF-κB的活化从而抑制TNF-α的产生。