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心血管疾病是一类严重危害人类健康、影响生活质量的常见病。高同型半胱氨酸血症是心血管疾病的一个新的独立危险因素,其对血管内皮造成的损伤受到广泛关注。本实验通过建立内皮损伤合并微血栓形成(络脉瘀阻)的大鼠模型,探讨通心络超微粉在阻止微血栓的形成,保护血管内皮和改善微循环障碍中的作用。
一、喂饲蛋氨酸后不同时间血浆同型半胱氨酸水平及内皮功能的测定
雄性SPF级SD大鼠随机分为正常组(Control组)、高同型半胱氨酸组(HHcy组)。HHcy组每天蛋氨酸灌胃1g/kg,琥珀酰磺胺噻唑(succinylsulfathiazole,SST)0.5 g/kg加入饮水中,连续4周。正常组予以等量纯水灌胃,饮水中不加SST。两组均于灌胃2、3、4周分别心脏采血,荧光免疫法检测血浆同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)水平、硝酸还原酶法测定血浆NO值、酶联免疫吸附双抗体夹心法测定血管性假血友病因子(von willebrand factor,vwF),以观测喂饲蛋氨酸后不同时间血浆同型半胱氨酸水平及内皮功能。结果表明,喂饲蛋氨酸4周可造成显著的血管内皮损伤。
二、大鼠内皮损伤对血管舒张功能的影响及通心络超微粉保护血管内皮作用的研究
雄性SPF级SD大鼠随机分为正常组(Control组)、高同型半胱氨酸组(HHcy组)和通心络组(TXL组)。HHcy组和TXL组均以蛋氨酸lg/kg灌胃,SST0.5 g/kg加入饮水,持续4周。正常组予以等量纯水灌胃对照处理。TXL组于蛋氨酸灌胃第4周开始加服通心络0.4g/kg,持续7天。实验结束进行离体主动脉环实验,观测内皮依赖性血管舒张功能及非内皮依赖性舒张功能的变化,同时检测血浆Hcy、NO、vWF值。结果表明血浆同型半胱氨酸水平升高能造成大鼠内皮损伤/功能障碍。通心络可以改善内皮依赖性血管舒张功能,起到保护血管内皮的作用,但其机制并不是通过降低血浆Hcy水平。
三、角叉菜胶/脂多糖联合造成大鼠体内微血栓形成模型的建立
雄性SPF级SD大鼠随机分为正常组(C0ntrol组)和微血栓形成组(LPS组)。LPS组腹腔注射角叉菜胶10mg/kg,16小时后再腹腔注射脂多糖0.2mg/kg。正常组腹腔注射等量生理盐水对照处理。注射LPS 20小时后,两组均心脏采血检测凝血指标、血小板计数,镜下观测肠系膜微循环。注射LPS 24小时后结束实验,检测血浆VWF和血浆NO。结果显示LPS组大鼠于注射LPS 24小时后体内有广泛微血栓形成,血液处于高凝期。
四、血管内皮损伤合并微血栓形成(络脉瘀阻)动物模型的建立及通心络超微粉的防治作用
雄性SD大鼠随机分为正常组(Control组)、内皮损伤合并微血栓形成组(HL组)、内皮损伤合并微血栓形成灌服通心络组(HTL组)。HL组和HTL组每天蛋氨酸灌胃1g/kg,SST 0.5 g/kg加入饮水中,正常组灌服等量纯水对照,饮水中不加SST,连续4周,HTL组于蛋氨酸灌胃第4周开始加服通心络0.4g/kg,持续7天。4周后,HL组和HTL组均腹腔注射角又菜胶10mg/kg,16小时后再腹腔注射脂多糖0.2mg/kg。于注射角叉菜胶前和注射脂多糖20小时后分别检测凝血功能,注射脂多糖20小时后检测血小板计数,镜下观测肠系膜微循环;24小时后结束实验,检测NO、vWF和血液流变指标。结果不但表明内皮损伤联合交叉菜胶(Carrageena,n,Ca)/脂多糖(lipopolySaCCharide,LPS)模型(络脉瘀阻模型)成功建立,更进一步证明了内皮损伤是体内微血栓形成的促进因素。并且证明了通心络超微粉可以有效阻止微血栓的形成,起到保护血管内皮和改善微循环障碍的作用。
结论:
1.本实验条件下,喂饲蛋氨酸(1g/kg,4周)引起高同型半胱氨酸血症,造成显著的血管内皮损伤。
2.建立大鼠高同型半胱氨酸血症模型,进一步完善了各项确定内皮损伤的检测指标,并且证实了通心络超微粉对内皮损伤/功能障碍具有良好的防治作用。
3.建立了角叉菜胶/脂多糖联合造成大鼠体内广泛微血栓形成模型。
4.通过血管内皮损伤合并微血栓形成(络脉瘀阻)动物模型的成功建立及观测通心络超微粉的防治作用,证明了内皮损伤是体内广泛微血栓形成的促进因素,也证实了通心络超微粉可以有效阻止微血栓的形成,起到保护血管内皮和改善微循环障碍的作用。