【摘 要】
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肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)的侵袭转移与基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)密切相关。研究表明,乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein, HB
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肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)的侵袭转移与基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases,MMPs)密切相关。研究表明,乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein, HBx)可增强肝癌细胞的侵袭能力[1,2,3],与其促进MMP3、MMP9及MMP14的表达有关。在人类基因组中已发现23个基因编码表达23种MMPs,其酶活性受基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinases, TIMPs)的抑制。本研究拟通过构建HBx真核表达载体,全面、综合分析HBx对MMPs及TIMPs表达的影响。本研究第一部分旨在构建HBx真核表达载体,并证实其在肝细胞中的表达。为此将B基因型乙型肝炎病毒X基因克隆到pcDNA3.1/HisC真核表达载体(重组载体为pcDNA3.1/HisC-XB)并瞬时转染HepG2细胞,以Anti-Xpress抗体进行Western Blot检测融合蛋白,证实HBx蛋白可在HepG2细胞中表达。本研究第二部分以pcDNA3.1/HisC及pcDNA3.1/HisC-XB分别转染HepG2细胞,G418筛选出抗性细胞克隆。半定量RT-PCR结果表明HBx蛋白可促进MMP2、7、13、14、16、17、19、23、24及TIMP1、4基因的转录,抑制MMP1、3、8、9、10、11、12、15、20及TIMP2、3基因的转录。明胶酶谱、胶原酶谱检测结果显示,HBx可促进Pro-MMP2表达以及MMP9的激活,抑制总MMP9的表达。反相明胶酶谱法检测结果显示,HBx可促进TIMP1、TIMP4的表达,同时抑制TIMP2、TIMP3的表达。总之,HBx蛋白对MMPs、TIMPs转录表达的影响是多方面的,但这种影响在HBx促进肝癌细胞侵袭转移过程中的确切机制有待进一步阐明。
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