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慢性前列腺炎(chronic prostatitis,CP)是中青年男性的常见病和多发病,约占泌尿外科门诊患者的33%。该病缠绵难愈、反复发作,给患者造成很大的生理痛苦及心理负担。美国国立卫生研究院已将前列腺炎、心肌梗死、不稳定性心绞痛和活动性Crohn病等一起列为影响居民生活质量最为严重的慢性疾病。然而,目前其发病机制尚未完全阐明,大量研究表明多种细胞因子构成的网络和级联反应可能是导致CP的主要原因。细胞因子信号转导抑制蛋白(suppressor of cytokine signal,SOCS)能够调节细胞对细胞因子的反应。但是,SOCS在本病发生发展过程中发挥的作用至今尚未得到论证。导师既往临床研究证实,前列化浊方(黄柏、茵陈、赤芍、红花、三七、柴胡、香附)在改善前列腺炎患者症状,提高患者生活质量方面具有满意的疗效和显著的优势。很多学者研究认为前列腺炎是一种自身免疫性疾病。基于此,本研究以实验性自身免疫性前列腺炎(experimental autoimmune prostatitis,EAP)大鼠模型为载体,通过前列化浊方的干预,采用RT-PCR和Western-blot方法检测大鼠前列腺组织相关细胞因子及SOCS的表达,揭示细胞因子与SOCS在CP发生发展中的共同作用,阐明前列化浊方治疗CP的作用机理,为临床应用前列化浊方提供实验依据。前列腺炎和良性前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia,BPH)常同时存在,相互影响。尽管有临床研究报道慢性炎症在BPH发病中发挥重要作用,与未患有前列腺炎男性相比,患有CP的患者更易发展为BPH。但是,目前CP和BPH的相关性研究大多以BPH患者为研究对象,研究者将BPH患者前列腺切除后获取的标本行病理学检查,以分析炎症和BPH的相互关系。有学者认为这类研究属回顾性研究,未能明确CP和BPH的发病顺序,也未能排除年龄在BPH发病中的影响。所以炎症和BPH之间的关系尚不明确,炎症在BPH进展中的作用机制尚缺乏强有力的证据。Biochim Biophys Acta杂志2013年1月刊出Kim HJ等采用脂多糖注射大鼠前列腺方法建立前列腺炎大鼠模型,研究CP导致BPH的机制。鉴于此,本研究在国内率先以EAP大鼠模型为载体,采用前瞻性研究方法初步探索炎症在BPH进展中的作用机制,既可明确炎症与BPH的发病顺序,也能够排除年龄在BPH进展中的影响,有利于揭示炎症在BPH进展中的作用机制及阐明前列化浊方干预BPH进展的机理。国内外均有学者认为有效防治前列腺炎,可以降低BPH的发生和减缓BPH的进展,慢性非细菌性前列腺炎为防治BPH提供了新靶点,为了延缓或阻断BPH发生发展,未来的研究应主要集中于细胞因子,它可能成为潜在的治疗靶点。故本研究以细胞因子、SOCS、Bcl-2和病理形态学等多角度多层次开展深入研究,以期揭示炎症在BPH进展中的作用机制,干预BPH的发生发展。本研究为导师承担的国家自然基金面上项目(81072814),研究分为两部分：文献综述和动物实验研究。在导师指导下,我参与了课题前期准备、建立动物模型、灌胃给药、实验取材、统计分析等工作。1.文献综述：本部分分别从NIH-Ⅲ型前列腺炎与相关细胞因子的研究进展,炎症在BPH进展中作用机制的研究进展两个方面进行综述。2.动物实验研究：炎症对前列腺增生的影响及前列化浊方的干预效应研究目的：观察前列化浊方对EAP大鼠的干预效应。方法：取240-300gSD雄性大鼠66只,随机分为正常组12只,实验组54只。采用注射自身抗原的方法建立实验性自身免疫性前列腺炎(experimental autoimmune prostatitis,EAP)大鼠模型,实验组分别于0、7、14、21天腹腔注射百白破疫苗0.5ml,并同时皮内多点注射大鼠前列腺蛋白提纯液(浓度15g/L)和福式完全佐剂的混悬液(比例1：1)1.0ml。正常组分别行腹腔及皮内多点注射0.9%生理盐水注射液0.5、1.0ml。在第35天,实验组处死6只大鼠,将前列腺组织送西苑医院病理室检验,病理结果证实成功建立了前列腺炎大鼠模型。剩余48只大鼠随机分为模型组、前列化浊方低剂量组(以下简称低剂量组)、前列化浊方中剂量组(以下简称中剂量组)、前列化浊方高剂量组(以下简称高剂量组),每组12只大鼠。除模型组和正常组给予蒸馏水外,低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予低剂量前列化浊方(按5.25g/kg体重给药)、中剂量前列化浊方(按10.5g/kg体重给药)和高剂量前列化浊方(按21.0g/kg体重给药),每天灌胃给药一次,连续干预30天后,腹腔注射20%乌拉坦(用量按体重计算,0.4ml/100g)麻醉大鼠。局部皮肤消毒,在无菌条件下,下腹部正中切口,根据膀胱及精囊的位置找到前列腺,取出前列腺组织,剪除多余脂肪组织,用冷生理盐水洗净,摘取左侧叶前列腺分别置固定液中,用于常规HE染色,光镜下观察各组大鼠前列腺腺腔及间质的炎性细胞浸润和增生情况。迅速取右侧前列腺组织置液氮中,用于RT-PCR和Western-blot检测。RT-PCR法测定大鼠前列腺组织Interleukin-1(IL-1)、Interleukin-6(IL-6)、Interleukin-10(IL-10) Interleukin-17(IL-17)、Tumor necrosis factor-a(TNF-a)和B cell leukemia-2(Bcl-2)的mRNA表达水平,Western-blot法检测大鼠前列腺组织SOCS-1和SOCS-3表达水平。结果：(1)组织病理学观察显示：模型组腺体排列紊乱,紧密,大量腺体呈乳头状增生,腺体上皮由立方状变为高柱状,腺腔内可见中性粒细胞；间质增生,血管扩张充血,组织水肿,大量中性粒细胞及少量淋巴细胞浸润。低剂量组、中剂量组和高剂量组炎症和腺体增生均呈不同程度减轻。组织病理学结果证实：成功建立了EAP大鼠模型,前列化浊方具有治疗前列腺炎和干预BPH进展的作用。(2)炎症因子检测显示：与正常组比较,模型组大鼠前列腺组织IL-10表达下降(P<0.01),IL-1、IL-6、IL-17和]NF-α表达均增高(P<0.01)。表明EAP大鼠前列腺组织存在强烈的炎症反应。与模型组比较,治疗组(低剂量组、中剂量组和高剂量组)大鼠前列腺组织IL-6、IL-17和TNF-α的表达均有下降(P<0.01)；其中,中剂量组下降尤为显著(P<0.01)。与模型组比较,IL-1在中剂量组大鼠前列腺组织表达下降明显(P<0.01),但高剂量组和低剂量组前列腺组织中IL-1水平与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。与模型组比较,治疗组大鼠前列腺组织IL-10表达均上升(P<0.01),中剂量组和低剂量组上升明显。提示前列化浊方对炎症因子的影响可能与剂量有关。(3)凋亡抑制因子Bcl-2检测显示：与正常组比较,模型组大鼠前列腺组织Bcl-2的表达明显升高(P<0.01)；与模型组比较,中剂量组大鼠前列腺组织Bcl-2的表达明显降低(P<0.01)。(4)SOCS-1和SOCS-3检测显示：与正常组比较,模型组大鼠前列腺组织SOCS-1和SOCS-3表达显著升高(P<0.01)；与模型组比较,治疗组大鼠前列腺组织SOCS-1和SOCS-3表达均下降(P<0.01),中剂量组下降最显著。结论：模型组大鼠病理形态学检测结果及前列腺组织炎症因子的表达水平均证实成功建立了EAP大鼠模型；治疗组大鼠前列腺组炎症和增生缓解,从形态学证实了前列化浊方治疗CP和干预BPH进展的疗效。模型组大鼠前列腺组织前炎症因子表达显著高于正常组,治疗组大鼠前列腺组织前炎症因子表达显著低于模型组。提示前列化浊方可能通过抑制前炎症细胞因子表达发挥治疗作用。模型组大鼠前列腺组织IL-10表达显著低于正常组,治疗组大鼠前列腺组织IL-10表达显著高于模型组。提示前列化浊方治疗CP的作用可能通过升高抗炎症因子表达和调节免疫功能实现的。模型组大鼠前列腺组织前炎症因子、SOCS-1和SOCS-3表达显著高于正常组,证实炎症因子与SOCS可能共同影响着CP的发生发展,JAK/STAT信号通路在CP的发生发展中可能扮演了重要的角色,有待深入研究。模型组大鼠前列腺组织Bcl-2表达显著高于正常组,中剂量组大鼠前列腺组织Bcl-2表达显著低于模型组。病理形态学检测显示模型组大鼠前列腺组织大量腺体呈乳头状增生,腺体上皮由立方状变为高柱状；治疗组大鼠前列腺极少量腺体乳头状增生,间质增生不明显。提示炎症在BPH进展中可能扮演重要角色,前列化浊方可能通过减轻前列腺组织炎症反应和下调Bcl-2表达干预BPH进展。