C-ets-2,C-myc,N-ras联合反义RNA对肝癌细胞的逆转及抗人肝癌单克隆抗体的研制

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:seasonlao
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肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一。由于临床症状出现较晚,发现大多已是晚期,因而预后极差,死亡率很高。现有的手段对肝癌早期诊断效果都不够理想。单克隆抗体的问世给肝癌的诊治带来了新的希望。十多年来抗人肿瘤单抗研究取得了令人瞩目的成果,已生产出一大批在各种人类肿瘤的诊断治疗中具有较好临床应用价值的单抗,同时抗人肝癌单克隆抗体的研究也取得一定成功。然而进一步寻找和研制新的具有更好特异性的单抗仍是抗人肝癌单抗研究的一个方向之一。本文作者制备了一株有较好特异性的抗人肝癌单抗,并对其在导向表阿霉素治疗肝癌方面进行了初步探讨。 作者利用人肝癌细胞株7721作抗原免疫小鼠,经二次基础免疫和一次加强免疫,取小鼠睥细胞与小鼠骨髓瘤8p2/0在PEG(50%)的作用下融合,共进行了3次成功的融合,获得了1000多株杂交瘤。经ELISA方法筛选出30多个阳性克隆。从中进一步筛选和鉴定得到一株有较好特异性的单抗B11。 经两次有限稀释法亚克隆,B11单抗阳性率达100%,经多次冻存与复苏仍具有分泌抗体的能力。核型分析结果显示B11杂交瘤细胞染色体数在90-98之间,大于两亲本细胞各自的染色体数,而小于它们二者之和。亚类鉴定表明B11单抗属于IgG2b。ELISA法测得单抗B11小鼠腹水效价在10~5-10~6。 在B11单抗的特异性方面,采用ELISA及ABC免疫组化的方法测定了其与20种人的肿瘤及正常细胞株的反应性。结果表明,B11与四株测定的人肝癌细胞株均有较强的阳性反应:另外,B11除与两株结肠癌细胞Lovo及LST174有明显交叉反应外,还与一株乳腺癌细胞BCa61有部分交叉反应;B11与其余十多种细胞无反应,其中包括三株胰腺癌细胞,三株
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