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高效毛细管电泳(HPCE)因具有高效、快速、灵敏、试剂和样品用量少等特点,被广泛应用于生命科学、生物化学、药物分析等各个领域。在各种毛细管电泳分离模式中,区带电泳具有简单、快速、重现性好的特点,应用最为广泛。
本文归纳总结了高效毛细管区带电泳的分离原理及影响因素,并系统综述了高效毛细管区带电泳在药物分析研究中的研究进展。在此基础上,运用高效毛细管区带电泳技术,以单因素变化法或正交实验设计方法优化了电泳条件,建立了四个未见文献报道的毛细管区带电泳分离测定方法。结果表明,本文所建立的这四个分离分析新方法都具有简单、快速、线性范围宽、重现性好的优点,用于实际样品的分离分析时,共存成分不会对分离造成干扰,研究工作为快速、准确测定这些活性成分提供了可靠的方法。研究工作的具体内容如下:
1.采用单因素变化法考察了缓冲溶液pH值和浓度、有机添加剂种类及浓度以及仪器条件对分离的影响基础上,选择了含有20mM硼砂和35%(v/v)乙腈的缓冲溶液(pH8.68)作为运行电解质溶液,20 kV为分离电压,254 nm为检测波长,柱温为室温,压力(0.5psi,3447.38 Pa)进样5.0s的电泳条件,建立了未见文献报道同时分离测定芸香苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖(1→6)-a-L-鼠李糖苷、山奈素-3-O-β-D-葡萄糖(1→6)-β-D-葡萄糖苷、槲皮苷四个黄酮类化合物的区带电泳新方法,将该方法用于植物花卉唐昌蒲不同部位中各成分的含量测定,结果满意。
2.经过单因素变化法对分离条件进行了系统优化后,建立了一个测定氯胺酮和去甲氯胺酮的毛细管区带电泳法。选定的电泳条件为:运行电解质溶液为含有15%(v/v)乙腈(pH6.24)、总浓度为45mM的Na2HPO4-KH2PO4缓冲溶液(pH6.24),分离电压20 kV,柱温为25℃,检测波长为200nm,压力(0.5psi,3447.38 Pa)进样5.0S。在此电泳条件下,氯胺酮和去甲氯胺酮能够在10min内实现基线分离。该方法可以用于尿样及血浆样品的测定,回收率在90%~105%之间。
3.对缓冲溶液的浓度、pH值及电泳仪器条件等参数以单因素变化法进行优化后,选择了10mM Na2B4O7-5 mMβ-CD-15%(v/v)乙腈-2%(v/v)乙二醇组成的缓冲溶液(pH9.11)为运行电解质溶液,以及20 kV的分离电压、25℃的柱温、200nm的检测波长和压力(0.5psi,3447.38 Pa)进样5.0s,建立了一个同时分离测定原儿茶醛、原儿茶酸、表儿茶素、儿茶素和槲皮素的简单、快速、灵敏度高、重现性好的高效毛细管区带电泳方法,并用此方法对大渡岗生饼、普洱茶(勐海)、中药儿茶、缅甸古茶树的提取物以及茶多酚中这五个组分进行了分析测定,结果满意。
4.采用6因素5水平的正交实验设计表(L25(56))对影响毛细管区带电泳分离测定黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷和绿原酸的分离条件(pH值、硼砂浓度、β-CD浓度、乙腈浓度)进行了优化,确定的分离条件是以含有10mM的硼砂、15 mMβ-CD、20%乙腈的缓冲溶液为运行缓冲溶液(pH9.11),分离电压20kV,分离温度25℃,检测波长200nm,压力(0.5psi,3447.38 Pa)进样.5.0s。在上述选定的实验条件下,黄芩素、汉黄芩素、黄芩苷和绿原酸可以在20min内达到基线分离。此方法用于双黄连口服液、一清颗粒、复方金银花颗粒、双黄连含片、双黄连胶囊和蒲地蓝消炎片中这四个组分的分离测定。