【摘 要】
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该研究通过根瘤农杆菌介导的叶盘法将t-PA基因转入烟草,构建t-PA基因整合于烟草核基因组的转基因烟草植株,初步建立了转基因烟草生产t-PA或其它生物药物的技术平台.我们的研
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该研究通过根瘤农杆菌介导的叶盘法将t-PA基因转入烟草,构建t-PA基因整合于烟草核基因组的转基因烟草植株,初步建立了转基因烟草生产t-PA或其它生物药物的技术平台.我们的研究主要做了如下工作:1.从人的黑色素瘤细胞(Boews cell line,A375)中提取总RNA,设计tPA特异性引物,通过RT-PCR扩增出tPA的cDNA.连接到pGEM-T-Easy载体后测序,结果与Genbank中的原始序列比较显示:除了第501位的碱基C错配为T外,其余碱基序列都正确,但这唯一的错配发生在密码子的第三位,使密码子GAC变为GAU,其编码的氨基酸Asp不变.2.利用双元载体pCAMBIA1302,分别构建植物表达载体pCA1302NS-tPA和融合表达载体pCA1302NSF-tPA.通过冻融法将中间质粒载体导入根瘤农杆菌(GV3101)中,制备了含有目的基因的根瘤农杆菌.3.用含目的基因的根瘤农杆菌GF3101通过叶园盘法转化烟草W38,建立了烟草组织培养及转化的优化条件.4.经PCR和Southern blotting鉴定,检测到有2棵烟草植株t-PA cDNA已整合到其基因组中;但Northern blotting以及体外溶解圈实验都没有相应的阳性结果.
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