化湿通络降浊方对痛风性关节炎大鼠的抗炎作用及对TLRs/NF-kB通路的影响

来源 :湖北民族大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:kevin_fisker
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目的:利用中药化湿通络降浊方干预痛风性关节炎(Gouty Arthritis,GA)模型大鼠,再通过观察大鼠一般情况、关节肿胀指数、病理切片,结合血清与关节滑膜组织蛋白及基因检测,探索中药化湿通络降浊方对GA大鼠的抗炎作用及其对TLRs/NF-kB通路的影响。方法:本实验选取60只雄性SD大鼠,SPF级,体质量200g(±20g),按随机原则分为空白组、模型组、秋水仙碱组、化湿通络降浊方高、中、低剂量共6组,每组10只,适应性给药共7天,于第5天灌胃后,用数码带表卡尺测量所有大鼠踝关节直径并记录,模型组、秋水仙碱组、化湿通络降浊方高、中、低剂量组大鼠踝关节注射MSU混悬液复制GA模型,模型复制成功后继续灌胃两天,期间记录大鼠造模后6、12、24、48、72小时踝关节直径。灌胃第7天后所有大鼠禁食不禁水24小时,取腹主动脉血,以ELISA法检测血清中IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白含量;取膝关节滑膜,RT-PCR法检测滑膜中TLR2、TLR4、my D88,NF-κB m RNA表达,以Western-blot法检测滑膜组织中TLR2、TLR4、my D88,NF-κB蛋白表达;取踝关节组织,做HE染色观察其病理学改变。结果:(1)大鼠一般情况:模型组、秋水仙碱组、中药高中低剂量组与正常组相比,大鼠的毛发、爪甲、食量、精神等状况均下降,其中模型组与中药高剂量组最为明显。(2)大鼠踝关节HE染色:结果显示。正常组踝关节面连续平滑,结构完整,滑膜细胞呈柱状有序排列,未见滑膜增生及炎细胞浸润;模型组可见滑膜表面明显增生,滑膜细胞排列紊乱,关节面不再平整,关节腔结构被破坏,伴炎性渗出物;秋水仙碱组及化湿通络降浊方中、低剂量组未见明显病变,说明炎症得到控制;化湿通络高剂量组滑膜出现轻度增生及少许炎性物质渗出,关节面略有不光滑。(3)大鼠血清ELISA检测:结果显示IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白水平各组均高于空白组,而秋水仙碱组及中药中、低剂量组升高相对较少,无显著性差异。(4)大鼠TLR2、TLR4、my D88,NF-κB基因检测,结果显示与正常组相比,模型组表达最强,具有显著性,秋水仙碱组、中药中低剂量组与模型组相比差异性最大,而组间比较无显著性差异。(5)大鼠膝关节滑膜WB检测:结果显示模型组、秋水仙碱组及中药高中低剂量组的TLR2、TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达水平明显高于空白组,说明TLR2、T LR4及My D88、NF-κB在GA发病过程中呈现出高表达。结论:1.化湿通络降浊方可显著减轻GA大鼠炎症反应;2.化湿通络降浊方减轻炎症反应的机制可能与调控TLRs/NF-kB信号通路有关。
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