目的：本试验通过对山东省14个地区的奶牛奶样进行主要病原菌调查，了解山东地区奶牛奶样菌株流行情况，为后期奶牛疾病防控提供依据；了解不同地区、不同菌株和不同样品间的耐药性差异，为养殖场临床用药提供指导；结合多位点序列分型(MLST)方法对不同菌株进行分子分型研究，比较菌株间的亲缘关系和耐药性关系，为菌株的流行病学研究提供技术支持。
　　方法：2017年6月--2018年7月，采集山东省14个地级市的1591份样品(1306份非乳房炎奶样和285份乳房炎奶样)，采用常规方法与生化鉴定、PCR技术对样品进行金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌分离鉴定；采用系统进化群试验对大肠杆菌致病性进行分析；采用微量肉汤稀释法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌进行耐药性检测，获得不同耐药表型；采用MLST方法对部分金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和链球菌进行分型。
　　结果：(1)1592份样品的阳性样品检出率为31.43%；共分离得到572株细菌，其中金黄色葡萄球菌165株，大肠杆菌346株；链球菌61株，未检测到MRSA菌株；346株大肠杆菌得到共生群A群259(74.86%)株，致病群87(25.14%)株；乳房炎致病菌株检出率高于非乳房炎，且养殖户高于规模化养殖场；乳房炎样品检出两种菌的检出率(19.59%)高于非乳房炎(11.66%)；不同地区检出率不同，青岛地区总体致病菌株检出最多(87/194，44.86%)；不同时间检出率不同，检出率随着采样时间温度的降低呈现下降趋势。
　　(2)126株金黄葡萄球菌分离菌株对青霉素(80.95%)耐药最严重，多重耐药率为24.60%(31/126)；240株大肠杆菌对各种药物耐药率均不高，对氟苯尼考(37.92%)耐药率最高，多重耐药率为19.58%(47/240)；产ESBLs菌株对β-内酰胺类抗菌药耐药率较高且多重耐药率(80.77%)极显著高于非产ESBLs菌株(12.15%)；61株链球菌对苯唑西林耐(77.05%)药率最高，多重耐药率为62.30%(38/61)。
　　(3)126株金黄色葡萄球菌共分为12个序列型，ST97(45/126，35.71%)为优势型别，共产生45种耐药谱；87株大肠杆菌共分为29个序列型，ST1434(36/87，41.40%)为优势型别，共产生22种耐药谱；13株无乳链球菌共产生3种ST型，ST67有优势型别；16株停乳链球菌共产生2种ST型，ST70为优势型别，产生7种耐药谱。
　　结论：山东地区奶牛奶样中主要病原菌为金黄色葡萄球菌，不同地区、不同采样时间细菌检出率不同，且乳房炎中细菌检出率显著高于非乳房炎，说明细菌的存在与乳房炎有关且与季节有关；养殖户细菌分离率明显高于规模化养殖场，且不同奶牛场细菌耐药情况不同，大多数对青霉素类药物产生耐药性，为治疗奶牛疾病临床用药提供支持；分子分型试验表明耐药表型与基因型没有明确相关性，得到的分子信息可以作为依据进行菌株追踪溯源。