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金针菇(Flammulina Velutipes, FV)是一种大型食用真菌,别名有朴菇、朴覃、冬菇、毛柄金钱菌、枸菌等。金针菇多糖(Flammulina Velutipes Polysaccharides, FVP)是从真菌金针菇中提取的一种多糖复合物,具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、益智等多种功效。本文对金针菇多糖的研究主要分为三个部分:分别是乙酰胆碱酯酶筛选系统的建立、金针菇多糖的纯化及活性研究和金针菇多糖纯化组分的结构的鉴定。实验首先建立乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选优化条件:pH=8.0的100mmol/L PBS缓冲溶液,AChE终浓度为0.05u/mL,ATCI终浓度为0.10mmol/L,显色剂DTNB终浓度为0.0667mmol/L,阳性对照为701μg/L的石杉碱甲,体系反应温度为37℃,反应时间为30min,测定波长为412nm。并对金针菇多糖进行了提取,得到三个组分,分别为:FVP40, FVP60,FVP80,进一步对其活性进行了分析,得出FVP60组分活性最高,达到46.17%。选出活性较高的FVP60组分和FVP40组分的粗多糖,对其后续的纯化及结构鉴定进一步分析。FVP40和FVP60经DEAE Sapharose fast flow阴离子交换柱和Sephacryl S系列凝胶柱层析分离纯化后,分别得到两个组分:FVP40C-1和FVP60C-1。经HPLC检测均为均一多糖组分。紫外全扫描结果显示两者均不含核酸和蛋白质。FVP40和FVP60通过单糖组成分析和甲基化分析,综合分析结果可得出:FVP40C-1,主要由五种单糖构成:岩藻糖、木糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖,摩尔比为:0.62:1.00:2.55:0.93:2.90;推断主链为葡萄糖1,6位连接和半乳糖1,6位连接方式,甘露糖和木糖的糖残基位置较多,连接方式相对比较复杂,还不能确定具体连接方式;岩藻糖一部分在支链上,另一部分以端基形式存在。FVP60C-1,主要由三种单糖构成:葡萄糖、甘露糖、半乳糖,摩尔比为1.54:1.00:0.68;多糖主链主要是由1,6位连接的葡萄糖和1,6位连接的半乳糖构成;由于半乳糖糖链的连接方式较多,并同时也作为支链与葡萄糖相连;甘露糖残基的连接位点也比较复杂,需要对FVP60C-1组分进行进一步的核磁共振分析以及其它理化性质分析,进一步确定该纯品的一级和多级结构。