【摘 要】
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随机插入的转基因方法严重阻碍了外源基因在转基因动物体内的有效整合和稳定遗传及表达，基因打靶技术可以解决这个问题。但基因打靶效率太低，本研究的目的就是在建立的体外多位点基因打靶技术的基础上，构建鱖鱼多位点基因打靶载体，为开展多位点基因打靶技术的动物体内实验提供关键材料。 先以SP1416-T质粒为模板设计2对引物（HRDS11／HRDS12和HRDS21／HRDS22）分别
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随机插入的转基因方法严重阻碍了外源基因在转基因动物体内的有效整合和稳定遗传及表达，基因打靶技术可以解决这个问题。但基因打靶效率太低，本研究的目的就是在建立的体外多位点基因打靶技术的基础上，构建鱖鱼多位点基因打靶载体，为开展多位点基因打靶技术的动物体内实验提供关键材料。 先以SP1416-T质粒为模板设计2对引物（HRDS11／HRDS12和HRDS21／HRDS22）分别扩增同源引导序列HRDS1和HRDS2，将扩增产物克隆到pMD18-T质粒。并依次将HRDS1、HRDS2克隆到已构建的pCTKNeo通用打靶载体中，构建成鱖鱼专用打靶载体pCTKNeo-HRDS1／2。然后以pCDNA3-hIFN1质粒为模板设计引物（IF1／IF2）扩增hIFN基因，将hIFN基因的扩增产物克隆到pCTKNeo-HRDS1／2载体上，经PCR、酶切、测序鉴定，最后构建成适用于鱖鱼的干扰素基因多位点打靶载体，即pCTKNeo-HRDS1／2-hIFN。
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