血栓通注射液为以三七（主根）为原料提取三七总皂苷制成的注射剂,其有效成分明确、临床疗效肯定、毒副作用小、质量可控、技术含量较高,具有良好的社会效益和经济效益。但现行的法定质量标准的定量分析方法落后,不利于生产控制、不利于保护市场的正当竞争。现对血栓通注射液HPLC指纹图谱、含量测定方法进行研究,为血栓通注射液法定质量标准的提高提供依据, 三七皂苷类成分的高效液相色谱含量测定和指纹图谱分析是当前的研究热点之一。根据目前研究的情况,作为法定质量标准应用仍存在的困难如下: ◆主成分分离困难——人参皂苷Rg₁和人参皂苷Re峰重叠或分离不完全,影响定性结果,损失主要指纹信息,影响定量准确性。 ◆梯度洗脱分离重现性差——人参皂苷Rb₁与其前后的峰存在出峰顺序交错、合并的情况,造成指纹信息不确定,影响人参皂苷Rb₁定量准确性。 ◆出峰顺序不确定,指纹图谱相似度计算需进行手动匹配,使结果欠客观——三七皂苷的HPLC图谱,随色谱柱、仪器的变化,梯度洗脱的HPLC图谱各指纹峰的保留时间不能完全重现,而且保留时间的变化不一定呈线性漂移,当相似度分析与暨往生成的标准共有模式进行匹配时,不得不进行各个峰的手动校正,主观因素对分析结果影响大;甚至当出现指纹峰合并、出峰顺序交错等情形,即使手动峰校正,与既往生成的标准共有模式进行匹配的报告结果并不可靠。 ◆分析成本过高——提高混合组分内在成分的质控水平,需要增加含量测定的成分数目,但对照品用量增加,分析成本将翻番增长,生产企业与质监部门均难以长期承受,而分析成本的提高,最终将转移到患者身上。 针对三七皂苷类成分的HPLC分析现状与作为法定质量标准应用中存在的困难,本研究首先制订了三七总皂苷HPLC指纹图谱及含量测定梯度的细化程序,着重考察了三七皂苷类成分的HPLC条件的耐用性,在不同品牌的HPLC仪器和十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱上,对梯度条件和柱温进行网格搜索;标定