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目的: 中药复方多糖是本实验室自主研发且初步已证明具有一定免疫增强作用,即cCHMPS,由党参、山楂、熟地、何首乌、当归、茯苓、补骨脂等11味重要组成,各单味药均购自于石河子市医药公司,其含糖量为77.10%;将cCHMPS作用于本实验室前期利用PCR-SSCP技术对京红1号蛋鸡基因筛选发现的三种不同MHC B-LβII基因型蛋仔鸡外周血淋巴细胞,检测cCHMPS对不同MHC B-LβII基因鸡淋巴细胞中TLR4信号通路、免疫信号分子以及细胞因子含量的变化,探讨MHC B-LβII基因多态性对cCHMPS调节机体免疫力剂量的影响,阐明cCHMPS调节鸡免疫功能的分子机制,为研究中药复方多糖在提高鸡抗病能力的作用及中药复方多糖应用于家禽养殖方面提供科学的理论依据。 方法: 1.分离不同MHC B-LβII基因型外周血鸡淋巴细胞,分别加入终浓度为100μg/mL、75μg/mL、50μg/mL、0μg/mL(高、中、低、对照组)的cCHMPS共培养16、24、32、48 h,采用Real-time PCR法检测淋巴细胞中TLR4、MYD88、TRAF-6、TRIF、IRF3、IFN-βmRNA的表达量。 2. 分离不同MHC B-LβII基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为100μg/mL、75μg/mL、50μg/mL、0μg/mL的cCHMPS共培养24 h,采用Real-time PCR法检测淋巴细胞中IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-12 、TNF-α、NF-κB mRNA的表达量。 3. 分离不同MHC B-LβII基因型鸡外周血淋巴细胞,分别加入终浓度为200μg/mL、100μg/mL、75μg/mL、50μg/mL、25μg/mL 、0μg/mL的cCHMPS共培养24 h,采用ELISA法检测淋巴细胞中cAMP、cGMP、Ca2+、NO、iNOS的含量。 结果: 1. 在各个检测点,与对照组相比,不同剂量的cCHMPS能显著增强不同 MHC B-LβII基因型鸡TLR4、MYD88、TRAF-6、TRIF、IRF3、IFN-βmRNA的表达量(P<0.05),只是TLR4、MYD88、TRAF-6、TRIF、IRF3、IFN-βmRNA的表达量在不同的时间点表达量不同;AA基因型鸡中,低、中剂量组MYD88、TRAF-6、TRIF、IRF3基因在各个检测点的表达量均显著高于高剂量组,TLR4 、IFN-β基因在24、32、48h显著高于高剂量组(P<0.05);BB基因型鸡中,高剂量组MYD88、TRAF-6、TRIF、IRF3基因在各个检测点的表达量均显著高于其他剂量组,TLR4基因在16 h、24 h显著高于其他剂量组,IFN-β基因在24、32、48h显著高于其他剂量组(P<0.05);BC基因型中,低剂量组MYD88、TRAF-6、TRIF、IRF3基因在各个检测点的表达量均显著高于其他剂量组,TLR4、IFN-β在24、32、48h显著高于其他剂量组(P<0.05)。 2. cCHMPS作用于各基因型鸡淋巴细胞后,能显著促进IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-12、NF-κB 、TNF-αmRNA的表达量(P<0.05);cCHMPS剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡淋巴细胞IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-12、NF-κB 、TNF-αmRNA的表达量均显著高于其他剂量组(P<0.05);cCHMPS剂量为100μg/mL时,BB基因型鸡淋巴细胞IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-12、NF-κB 、TNF-αmRNA的表达量均显著高于其他剂量组(P<0.05)。 3. cCHMPS组与对照组相比,均能显著提高细胞培养液上清中cAMP、cGMP、Ca2+、NO、iNOS的含量(P<0.05);cCHMPS剂量为50μg/mL时,AA、BC基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cGMP、cAMP 、Ca2+、NO、iNOS的含量显著高于其他剂量组(P<0.05);cCHMPS剂量为100μg/mL时, BB基因型鸡淋巴细胞培养上清液中cAMP 、cGMP、Ca2+、NO、iNOS的含量显著高于其他剂量组(P<0.05)。 结论: 1. cCHMPS能够提高鸡淋巴细胞中TLR4信号通路中相关基因的表达量,即 cCHMPS可以通过不同基因型鸡淋巴细胞表面的TLR4受体,激活MYD88依赖性信号转导途径和TRIF依赖性信号转导途径,优化鸡淋巴细胞免疫状态,同时MHC B-LβII基因多态性对促进TLR4信号通路中相关基因表达的的最适cCHMPS的剂量有一定的影响。 2. cCHMPS可以促进淋巴细胞相关细胞因子的分泌而提高机体的免疫力,并且MHC B-LβII基因多态性对促进淋巴细胞相关细胞因子分泌的最适cCHMPS的剂量有一定的影响。 3.cCHMPS可以促进淋巴细胞免疫信号分子的分泌而提高机体的免疫力,并且MHC B-LβII基因多态性对促进淋巴细胞免疫信号分子的分泌最适cCHMPS的剂量有一定的影响。