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第一部分重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT-siRNA转染胰腺癌PANC-1细胞及其沉默效应的研究目的：用重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT-siRNA转染胰腺癌PANC-1细胞,了解其对hTERT-siRNA表达的影响,初步观察其在体外细胞水平上抗胰腺癌的作用。方法：通过脂质体2000将重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT-siRNA转染PANC-1细胞,通过杀稻瘟菌素进行阳性细胞筛选2周,提取RNA,进行RT-PCR检测。结果：RT-PCR结果显示：转染131、141干扰片段的PANC-1细胞中hTERT-mRNA的表达较NC阴性对照和未转质粒的PANC-1细胞对照中的hTERT-mRNA表达水平显著下降。同时内参对照GAPDH,各细胞间无明显差别。结论：重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT-siRNA能特异性的诱导同源互补的mRNA降解,下调hTERT mRNA表达,具有良好的RNAi沉默效应。第二部分重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT-siRNA转染胰腺癌PANC-1细胞后对癌细胞凋亡及增值的影响目的：用重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT-siRNA转染胰腺癌PANC-1细胞,观察其对胰腺癌PANC-1细胞的凋亡和增值的作用。方法：通过已成功转染了重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-hTERT-siRNA胰腺癌PANC-1细胞,48小时后收集细胞,经Annexin V、PI及Brdu染色,应用流式细胞仪观察细胞的凋亡及增值情况。结果：流式结果显示：转染112、121、131、141干扰片段的PANC-1细胞晚期凋亡较NC阴性对照和未转质粒的PANC-1细胞明显增多,但对早期凋亡无明显影响,对转染112、121、131、141干扰片段的PANC-1细胞的增值均有不同程度的影响,其中131、141对增值影响更明显。结论：hTERTsiRNA干扰能通过特异性抑制hTERTmRNA表达来抑制肿瘤细胞端粒酶的表达,进而达到在体外抑制胰腺癌细胞生长、增殖,促进胰腺癌细胞凋亡的作用,提示hTERT mRNA是端粒酶活性的重要影响因子,是通过降低端粒酶活性来治疗胰腺癌的可靠位点。