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食管癌是我国常见的恶性肿瘤，其发病机制至今不甚明了。有研究发现与正常的食管上皮组织相比食管癌中的核基质蛋白(NMPs)有明显改变，提示某些核基质蛋白可能参与了食管癌的发生与发展，但究竟是哪些核基质蛋白有变化尚不清楚。为此，本研究联合运用双向电泳、基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、RT-PCR、cDNA克隆测序和生物信息学分析等技术手段对食管癌细胞差异表达核基质蛋白进行了研究，以期为进一步研究食管癌的发病机制提供新线索。 主要研究内容与方法： 1．应用硫酸铵沉淀法提取SHEE和SHEEC细胞的NMPs，通过Western blotting对SHEE和SHEEC细胞的NMPs进行检测分析。两种细胞的NMPs经双向凝胶电泳—银染后，利用PDQuest6.2软件分析SHEE和SHEEC细胞NMPs的双向电泳结果，并对其中三个差异表达NMPs进行MALDI-TOF-MS分析。 2．通过RT-PCR、cDNA克隆和测序等技术进一步验证食管癌差异表达NMPs—STRBP8：分别提取SHEE和SHEEC细胞的总RNA，运用RT-PCR扩增STRBP8 cDNA片段，插入pGEM-T easy载体，转化TOP10F’大肠杆菌感受态细胞，在Amp下筛选阳性克隆，DNA序列测定后进行BLAST比对。 3．利用生物信息学手段对STRBP8的结构和功能进行初步预测。 主要研究结果： 1．Western blotting分析结果显示在所提取的NMPs中组蛋白等非NMPs组分已被基本去除，而DNA拓扑异构酶Ⅱα和PCNA等主要NMPs组分被保留下来，表明NMPs的质量是可靠的，利用双向电泳和MALDI-TOF-MS技术初步鉴定出了3个食管癌差异表达NMPs—Cytoskeletal tropomyosin，FKBP6和STRBP8。 2．利用RT-PCR成功扩增出STRBP8 cDNA。将其cDNA序列插入pGEM-T easy载体后，转化TOP10F’大肠杆菌感受态细胞，经筛选获得含STRBP8的阳性克隆。测序结果显示，克隆得到的STRBP8的cDNA片段与Genebank数据库上的序列是完全一致的。 3．利用生物信息学对STRBP8的结构和功能进行了初步的预测，发现STRBP8存在多个糖基化和磷酸化位点，其二级结构以无规线团为主并有部分α-螺旋和β-折叠结构。 结论与意义: 1.在我们实验室建立了双向凝胶电泳一银染技术并优化了部分实验条件;利用PDQuest6.2软件建立了一套成熟的双向电泳凝胶图像分析方法。 2.通过双向凝胶电泳和MALDI一TOF一MS等技术对SHEE和SHEEC之间的NMPs的差异性进行研究，初步鉴定出3个差异表达NMPs，提示可能与食管癌相关。 3.利用RT一PCR、cDNA克隆与测序分析发现STRBPS mRNA只出现在食管癌细胞SHEEC中，进一步验证了质谱分析结果。 4.利用生物信息学手段对STRBPS的结构与功能所进行初步预测，为深入研究STRBPS在食管癌中的功能提供了理论依据。