油茶粕蛋白提取及其水解物生物活性研究

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油茶(Camellia oleifera)属于茶科山茶属,为常绿小乔木,是我国主要的油料作物之一。据统计,我国每年产油茶籽100多万吨,油茶籽副产品—油茶粕年平均产量约为68.39万吨,但是油茶籽粕的有效利用率很低,造成了很大的浪费。油茶籽中蛋白质的含量在15%-20%,可以作为新型的植物蛋白资源,近几年通过研究报道,油茶粕蛋白多肽具有降血压,免疫,抗氧化等功能,从而成为医学和功能性食品学的热门研究领域。本论文以油茶籽为原材料提取蛋白,研究了将脱脂后的油茶粕经纤维素酶预处理后再提取油茶蛋白的工艺路线,优化得到最佳的酶预处理条件为:酶与底物比为2.67%,水解温度为43.67℃,水解时间为10.41h,再用后续处理条件水解后油茶粕蛋白质的提取率为70.36%,与未使用纤维素酶预处理的相比(蛋白提取率64.97%)有明显提高。以油茶粕蛋白为原料以pH值(X1)、水解时间(X2,h)、水解温度(X3,℃)和酶与底物比(X4,%)作为参试因子,以油茶粕蛋白水解液中ACE抑制活性为响应值,利用Design-Expert统计分析软件得到了ACEI随pH值、水解时间、水解温度和酶与底物比变化的标准回归模型。优化的水解条件为:最适pH值为8.1,最佳酶与底物比为1.57%,最佳的水解温度为50.5℃和最佳的水解时间为6.66h。在此最佳条件下,油茶粕多肽的模型预测ACEI值为86.17%.通过对SHR灌胃由碱性蛋白酶水解制得的油茶粕多肽(MW<3kDa)来研究其降压效果。分别对SHR高、中、低剂量组灌胃500mg/kg·bw、250mg/kg·bw、100mg/kg·bw,在灌胃4h后出现最低值,总体的变化趋势呈U型,其中不同剂量组和阳性对照组对大鼠的降压效果有显著差异(P<0.05)。长期给药9周油茶粕蛋白水解液后,与空白对照组相比,阳性对照组和各剂量组的SHR的收缩压均显著下降(P<0.01),并随给药时间的延长,原发性高血压大鼠的收缩压下降趋势减缓并趋于稳定,但是对SHR体重影响却没有显著性差异(P>0.05)。试验结果表明油茶粕蛋白水解液对原发性高血压大鼠具有短期和长期降压效果。以昆明种小鼠为试验对象,通过注射环磷酰胺来建立免疫低下的免疫抑制模型组,采用高、中、低剂量(分别为500mg/kg·bw、250mg/kg·bw、100mg/kg·bw)的油茶粕多肽喂养小鼠,油茶粕多肽高、中、低剂量组小鼠的胸腺指数和脾脏指数有明显提高,并与油茶粕多肽的剂量成正相关,且油茶粕多肽高、中剂量组能显著恢复注射环磷酰胺造成的免疫低下小鼠的胸腺指数和脾脏指数(P<0.01)。油茶粕多肽高剂量组具有较强的促进吞噬功能活性(P<0.01),使DNFB致小鼠迟发型超敏反应增强(P<0.05),能显著提高小鼠骨髓细胞DNA含量(P<0.05),有效促进抗体生成活性(P<0.05);在对小鼠廓清指数的影响试验和小鼠迟发型超敏反应试验中存在明显的剂量-效应关系。
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