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目的:建立一种与人IgAN临床与病理变化特点相似或相同的、无副作用或副作用小的、易重复性的、能作为IgAN病因和发病机制研究、新药开发等实验研究的IgAN模型极为重要。本次采用的是(已被同行所认可的)用金葡菌细胞膜20肽的麦芽糖结合蛋白(MBP)诱导的IgAN模型。本实验又重复建立了此模型并加以完善,同时对模型鼠血清进行了IgA的检测分析。
方法:本实验分模型组、MBP阴性对照组、洗脱缓冲液阴性对照组、空白对照组四组,前三组隔周分别用MBP-20肽融合蛋白溶液,MBP溶液,洗脱缓冲液与弗氏不完全佐荆乳化液进行颈背部皮下免疫BALB/c小鼠;空白对照组不给任何处理。实验周期为21周。第9周开始每周收集各组小鼠尿液测定尿蛋白和血尿。21周处死后取肾组织分三部分:迅速液氮固定制作冰冻切片行IgA、IgG、IgM、C3的免疫荧光检测;多聚甲醛固定制作石蜡切片行HE染色;戊二醛固定制作超薄切片行电镜检测。每例鼠分别取血清,采用ELISA技术进行IgA含量的检测。
结果:①重复建立并完善了IgAN模型,其中鼠的尿蛋白、血尿含量和肾组织的HE染色、电镜检测及IgA、IgG、IgM、C3的荧光检测结果,符合IgAN的临床、病理变化特点,可作为鉴定模型的指标。②鼠血清经ELISA检测发现,波长在450nm/630nm下测定,模型鼠血清IgA含量明显高于其它各对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。小鼠血清量少,取血困难,本实验血清样本1/250稀释要比1/100稀释时测得的阳性率高,这为体外血清水平研究IgAN提供依据。
结论:此IgAN的模型临床特点和病理特点符合人IgAN的变化,可作为人IgAN相关研究的基础平台。ELISA检测血清IgA时,血清的稀释倍数大检出率反而高,这一结果可为实验窒的研究提供参考价值。