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Nanog是干细胞的主要标记基因之一,它在干细胞内普遍表达,在诱导多能干细胞(iPSCs)及癌症研究领域有着十分重要的意义。诱导多能干细胞与癌症干细胞有很多共同的代谢通路,最新研究表明小鼠诱导多能干细胞(iPSCs)在肺癌细胞上清液的诱导下可以获得具有癌症特征的干细胞,即癌症干细胞,这表明诱导体细胞为癌症干细胞存在可能性。为了深入研究Nanog在诱导多能干细胞中的调控作用,探索诱导体细胞为癌症干细胞的可行性方法。本研究采用Tet-on3G诱导表达系统,将Nanog基因转入到小鼠NIH/3T3成纤维细胞中,在Doxycycline诱导下,控制外源基因Nanog的表达;并用A172、HCC 1937、HL-60、Vcap4种癌细胞上清液条件培养基对其进行诱导,以期获得诱导性癌症干细胞(iCSCs),为阐释癌症的形成和发生机制提供一个体外研究系统,主要研究结果如下:1、构建pTRE-mcherry-Nanog表达载体,通过Xfect Polymer成功将其转入到小鼠NIH/3T3细胞中;确定了外源基因转化NIH/3T3细胞及诱导目的基因表达的最佳条件:(1)质粒量为5μg,(2)强力霉素浓度为400 ng/ml,(3)细胞密度约为50%,阳性克隆(即荧光细胞)的细胞比例大于20%。2、通过 Real time PCR 检测 Doxycycline 诱导下 Manog、Oct3/4、Caspase 3、p38等关键基因的表达量,Nanog重组细胞干细胞相关基因Nanog和Oct3/4表达显著提高,细胞凋亡相关基因Caspase3下调表达,细胞周期相关基因p38上调表达。3、利用Vcap等4种癌细胞上清液对Nanog重组细胞进一步的诱导,在Vcap癌细胞上清液诱导培养后,细胞形态等特征发生较明显变化,体现为细胞形态与Vcap癌细胞类似,细胞贴壁的时间加长。4、Nanog重组细胞经过Vcap癌细胞上清液诱导后,Nanog基因表达量上调;经过A172、HCC 1937、HL-60三种癌细胞上清液诱导后,Nanog基因表达量均下调;经过以上4种癌细胞上清液诱导后,Caspase3基因表达量均下调。