论文部分内容阅读
自然杀伤细胞(Nature killer cell, NK cell)对肿瘤的杀伤作用已有深入研究,而肿瘤细胞对NK细胞的作用很少有人报道。本论文初步探讨红白血病细胞系K562诱导NK细胞凋亡的作用及可能的分子机制。利用MACS免疫磁珠阴性分选方法纯化健康志愿者外周血NK细胞,用重组人白介素-2(rhIL-2)和干细胞培养液(SCGM)培养NK细胞。将NK细胞与红白血病细胞系K562按不同效靶比例和作用时间混合培养,用流式细胞仪及PE-AnnexinV/7-AAD凋亡试剂盒检测这两种细胞相互作用时各自的凋亡情況。为了探讨FasL/Fas信号途径在红白血病细胞系K562诱导NK细胞凋亡中的作用,将NK细胞和红白血病细胞系K562按1:5混合后,利用流式细胞仪测定诱导NK细胞凋亡时,NK细胞表面膜结合型Fas (membrane bound Fas, mFas)和红白血病细胞系K562表面膜结合型FasL (membrane bound FasL, mFasL)的平均荧光强度(Mean fluore scence intensity, MFI)水平变化。并分别加入Fas中和性和激活性抗体,用DAPI染色法和流式细胞仪观察、检测NK细胞凋亡变化。结果显示免疫磁珠分选后NK细胞纯度经鉴定达(93.99±4.22)%;K562细胞和NK细胞在相同效靶比情况下,随着共培养时间的延长,NK细胞凋亡率显著增高,呈时间依赖性;而在相同培养时间时,随着效靶比降低,NK细胞凋亡率逐渐增高,同时对K562细胞的杀伤活性逐渐减弱。K562细胞诱导NK细胞凋亡时,检测到NK细胞表面Fas平均荧光强度水平显著升高,而K562细胞表面的mFasL的MFI表达变化无统计学意义。用Fas的中和性抗体ZB4阻断FasL/Fas信号通路后,K562细胞诱导NK细胞凋亡率显著下降。将Fas的激活性抗体CH11作用于NK细胞时,DAPI染色结果显示随着抗体浓度的增加,NK细胞的细胞核边缘越来越不规则,染色体逐渐浓集,着色开始加重,产生很强蓝色荧光,并伴有核固缩,凋亡程度逐渐增强。以上结果提示K562细胞对活化的NK细胞有诱导凋亡的作用,其作用机制与FasL/Fas途径有关,这可能是肿瘤细胞发生免疫逃逸的机制之一。