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目的采用RNA干涉技术沉默神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)热休克蛋白70(HSP70)的表达,观察HSP70沉默对缺氧诱导的SH-SY5Y细胞凋亡及BAG-1、NF-κB、caspase-3表达的影响。方法培养SH-SY5Y细胞至对数生长期,采用RNA干涉技术沉默HSP70,将SH-SY5Y细胞分为4组,分别为细胞对照组(正常的SH-SY5Y细胞)、慢病毒对照组(感染含GFP但不含靶向HSP70 siRNA的慢病毒)、慢病毒感染组Ⅰ(感染含GFP及靶向HSP70 siRNA-Ⅰ的慢病毒)、慢病毒感染组Ⅱ(感染含GFP及靶向HSP70 siRNA-Ⅱ的慢病毒)。采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测缺氧处理后HSP70蛋白表达水平;实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(q RT-PCR)检测HSP70 m RNA转录水平。4组细胞分别缺氧4h、8h、12h后再复氧24h,采用CCK-8法检测SH-SY5Y细胞生长与增殖情况。选择8h为最佳缺氧时间,流式细胞仪检测分析SH-SY5Y细胞凋亡率和细胞周期;q RT-PCR检测缺氧8h时SH-SY5Y细胞BAG-1 m RNA转录水平;Western blotting检测缺氧8h时SH-SY5Y细胞BAG-1、NF-κB、caspase-3蛋白表达水平。结果1.重组慢病毒siRNA-Ⅰ感染组和重组慢病毒siRNA-Ⅱ感染组HSP70 m RNA转录水平分别低于细胞对照组和慢病毒对照组(2-△△ct为1.00±0.04,0.98±0.12,0.22±0.03,0.15±0.01),差异均有统计学意义(P<0.05)。重组慢病毒siRNA-Ⅰ感染组和重组慢病毒siRNA-Ⅱ感染组HSP70蛋白表达水平分别低于细胞对照组和慢病毒对照组(灰度值分别为1.31±0.23,1.26±0.17,0.77±0.10,0.80±0.17),差异均有统计学意义(P<0.05)。2.随缺氧时间的延长,4组细胞的细胞活性先增强,在缺氧8h时细胞活性达高峰,随后各组细胞活性均有下降的趋势。缺氧8h时,重组慢病毒siRNA-Ⅰ感染组及重组慢病毒siRNA-Ⅱ感染组细胞活性均低于细胞对照组及慢病毒对照组(OD值分别为0.85±0.02,0.84±0.03,0.23±0.03,0.25±0.02,P<0.05)。3.与细胞对照组和慢病毒对照组比较,重组慢病毒siRNA-Ⅰ感染组及重组慢病毒siRNA-Ⅱ感染组细胞凋亡均显著升高(细胞凋亡率(%)分别为11.17±1.12,11.40±0.40,68.97±6.82,58.10±3.16,P<0.05)。4.与细胞对照组和慢病毒对照组比较,重组慢病毒siRNA-Ⅰ感染组及重组慢病毒siRNA-Ⅱ感染组BAG-1 m RNA转录水平无显著差异(2-△△ct为1.00±0.06,0.94±0.07,0.92±0.05,0.91±0.09,P>0.05);重组慢病毒siRNA-Ⅰ感染组及重组慢病毒siRNA-Ⅱ感染组与细胞对照组和慢病毒对照组比较,BAG-1蛋白表达水平无显著差异(BAG-1L灰度值分别为0.96±0.10,0.99±0.03,1.03±0.02,1.02±0.07,P>0.05;BAG-1M灰度值分别0.95±0.03,0.98±0.05,1.02±0.09,1.00±0.01,P>0.05;BAG-1S灰度值分别1.02±0.04,1.00±0.07,1.03±0.07,0.96±0.04,P>0.05);NF-κB蛋白表达水平显著升高(灰度值分别为1.00±0.00,1.01±0.08,1.95±0.22,2.03±0.16,P<0.05);caspase-3蛋白表达水平显著升高(灰度值分别为0.82±0.04,0.83±0.03,1.19±0.04,1.21±0.04,P<0.05)。结论HSP70沉默可促进缺血缺氧SH-SY5Y细胞凋亡,降低SH-SY5Y细胞活力,增加NF-κB、caspase-3的蛋白表达水平,但对BAG-1蛋白表达及m RNA转录水平无明显影响。因此,HSP70沉默可增加SH-SY5Y细胞对缺氧耐受的敏感性,其机制可能是通过上调NF-κB及caspase-3表达促进细胞凋亡实现。