【摘 要】
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已有研究显示维拉帕米（verapamil）能够预防肉鸡腹水发生和降低腹水心脏指数,有利于防止右心肥大及功能性衰竭,对失血性休克犬具有心脏等重要器官的保护作用。本研究主要从心肌细胞的离子通道角度,通过膜片钳技术与动作电位技术分析维拉帕米对细胞h EGR（human ether-a-go-go related gene）相关基因电流及动作电位的影响。以期能为该药的离子通道学研究及安全性评价提供参考。得
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已有研究显示维拉帕米（verapamil）能够预防肉鸡腹水发生和降低腹水心脏指数,有利于防止右心肥大及功能性衰竭,对失血性休克犬具有心脏等重要器官的保护作用。本研究主要从心肌细胞的离子通道角度,通过膜片钳技术与动作电位技术分析维拉帕米对细胞h EGR（human ether-a-go-go related gene）相关基因电流及动作电位的影响。以期能为该药的离子通道学研究及安全性评价提供参考。得到以下结果:1、用稳定表达h EGR通道的胚肾细胞（HEK293-h EGR）为实验对象,以Multi Clamp700B手动膜片钳系统钳制HEK293细胞形成全细胞电压钳模式,并以相应的电压诱发h EGR电流。通过6通道灌流系统分别给予细胞0.001、0.01、0.1和1μmol/L的匹莫齐特或0.1、1、3、10μmol/L的维拉帕米。记录h EGR通道尾电流并用Clampex 10.3软件获取各给药浓度下的尾电流峰值,数据用Clampfit 10.3软件进行分析。以溶媒对照下记录的尾电流峰值作为100%,对数据进行标准化处理。IC50计算用标准希尔方程完成（Graphpad Prism 5.00）。结果显示,0.001、0.01、0.1和1μmol/L的匹莫齐特浓度依赖性抑制h EGR电流,其IC50为0.01672μmol/L。相同实验条件下,0.1、1、3、10μmol/L的维拉帕米同样对h EGR电流有浓度依赖性抑制作用,其IC50为0.2981μmol/L。2、解剖获得急性分离的豚鼠右心室乳头肌,以95%氧气和5%二氧化碳混合气体饱和的改良台氏液恒温（35℃）恒速（5ml/min）灌流,以1.5倍阈强度,频率为1 Hz,波宽为2 ms的方波刺激组织,使之产生动作电位。通过灌流系统分别给予乳头肌组织含匹莫齐特浓度分别为0.01、0.1、1和3μmol/L的改良台氏液或维拉帕米浓度分别0.01、0.1、1和10μmol/L的改良台氏液。使用Lab Scribe 2软件记录动作电位,并用软件Lab Chat7分析维拉帕米/匹莫齐特（阳性对照品）对豚鼠乳头肌动作电位时程APD（Action Potential Duration）30、APD90和APD30-90等的影响。发现与溶媒对照相比,0.01、0.1、1和3μmol/L匹莫齐特对豚鼠乳头肌动作电位各参数(APD30、APD90、APD30-90)有浓度依赖的延长作用,实验所选最高浓度3μmol/L的匹莫齐特对APD30、APD90、APD30-90的延长百分比分别为95.408%、78.954%、47.173%。相同实验条件下,0.01、0.1、1和10μmol/L的维拉帕米对豚鼠乳头肌动作电位各参数(APD30、APD90、APD30-90)有浓度依赖的缩短作用,实验所选最高浓度10μmol/L的维拉帕米对APD30、APD90、APD30-90的缩短百分比分别为-63.384%、-44.070%、-20.171%。本研究显示,匹莫齐特及维拉帕米均可浓度依赖性抑制HEK293细胞h EGR电流。匹莫齐特可以浓度依赖性延长豚鼠乳头肌动作电位时程,维拉帕米浓度依赖性缩短豚鼠乳头肌动作电位时程。
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