【摘 要】
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雷公藤作为传统中药具有良好的抗炎、抗肿瘤和免疫抑制活性,在中国已经有几千年的使用历史。其主要活性成分雷公藤甲素几乎具有雷公藤所有的生理活性,但是由于低水溶性和高毒性,严重限制了它的临床应用。而靶向技术目前已经发展的比较成熟,如果能使雷公藤甲素靶向递送,将对充分发挥其活性和减小毒性有重要意义。成纤维活化蛋白在绝大部分癌细胞中高表达,是一个潜在的抗癌药物靶点。本论文设计、合成一系列低毒性的雷公藤甲素多
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雷公藤作为传统中药具有良好的抗炎、抗肿瘤和免疫抑制活性,在中国已经有几千年的使用历史。其主要活性成分雷公藤甲素几乎具有雷公藤所有的生理活性,但是由于低水溶性和高毒性,严重限制了它的临床应用。而靶向技术目前已经发展的比较成熟,如果能使雷公藤甲素靶向递送,将对充分发挥其活性和减小毒性有重要意义。成纤维活化蛋白在绝大部分癌细胞中高表达,是一个潜在的抗癌药物靶点。本论文设计、合成一系列低毒性的雷公藤甲素多肽偶联物,用于筛选专一性靶向成纤维蛋白的药物先导化合物。我们利用蛋白免疫印迹分析评估了不同癌细胞系中成纤维活化蛋白（FAP）的表达水平,发现FAP在所检测的六种癌细胞系中均有表达,其在人胰腺癌细胞MIA Pa Ca-2中的表达含量最低,而在人胰腺癌细胞Capan-1和人胚肾细胞HEK293T中表达量相对较高。采用蛋白免疫印迹分析方法验证了雷公藤甲素及其三肽类似物诱导RNA PolⅡ的降解的生物活性。随后,我们通过固相合成的方法合成修饰所需的多肽片段,利用缩合反应将雷公藤甲素与多肽片段相连,合成19个雷公藤甲素多肽偶联物。并采用传统的化学合成策略,合成已经进入临床二期的雷公藤甲素的前体药物Minnelide,作为雷公藤甲素多肽类似物进行活性检测的阳性对照药物。接着,我们通过不同的后脯氨酸切割酶FAP,PREP（脯氨酰寡肽酶）和DPPⅣ（二肽基肽酶4）对各种不同雷公藤甲素多肽偶联物的体外酶学检测,筛选特异性靶向FAP的雷公藤甲素的多肽偶联物。结果发现FAP能够很好地水解其中4个雷公藤甲素三肽类似物,并对CTL0447-1（TPL-Gly-L-Pro-Gly-Iso）具有最好的水解效率和专一性。然后,我们采用Alamar Blue荧光检测法,细胞水平上评估了雷公藤甲素多肽类似物以及雷公藤甲素、Minnelide的抗肿瘤生物活性,测试表明,CTL0447-1（TPL-Gly-L-Pro-Gly-Iso）能够很好地抑制各种不同癌细胞的细胞增殖。免疫印迹实验进一步证明,雷公藤甲素三肽类似物仍然能够诱导RNA PolⅡ的降解,提示雷公藤甲素三肽在体内可能通过抑制XPB的活性而抑制细胞增殖。本论文的结果将为发展低毒高效的雷公藤甲素药物先导化合物奠定良好的基础,并为设计其他以FAP为靶标的抗肿瘤药物提供借鉴。
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