【摘 要】
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目的:通过构建骨桥蛋白shRNA表达载体,探索卵巢癌基因治疗新途径。
方法:根据基因库上的OPN-mRNA序列,设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链
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目的:通过构建骨桥蛋白shRNA表达载体,探索卵巢癌基因治疗新途径。
方法:根据基因库上的OPN-mRNA序列,设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSilence质粒中,并对重组质粒进行酶切及序列鉴定。将构建好的重组质粒转染入对数生长期高转移性人卵巢癌细胞株HO-8910PM,Western-Blot法分析转染后卵巢癌细胞的OPN蛋白表达情况。
结果: OPNshRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。Western Blot结果显示卵巢癌细胞HO-8910PM转染OPNshRNA表达载体后,OPN蛋白表达降低。
结论:靶向骨桥蛋白shRNA表达载体的构建成功,可抑制高转移性卵巢癌细胞株骨桥蛋白表达,为研究降低卵巢癌骨桥蛋白表达对发挥抗肿瘤效应打下基础。
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