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原发性肝癌(PLC)是我国最常见的恶性肿瘤之一,因其早期诊断困难导致肝癌死亡率较高。临床上,甲胎蛋白(AFP)是检测的首选指标,但亦发现一些良性肝胆疾病患者中AFP也会升高,并且部分PLC患者血清AFP成低值甚至为阴性。因此以单一AFP作为PLC的肿瘤标志物容易造成PLC的误诊和漏诊。近年发现结合珠蛋白(Hp)可区分肝癌和良性肝病,并在PLC患者血样中升高,如对患者进行AFP和Hp联合检测,将对肝癌的早期诊断、早期治疗及提高肝癌患者的存活率具有重要意义。本研究通过制备AFP和Hp单克隆抗体、建立AFP与Hp的化学发光法(CLIA)检测体系,意在探讨AFP、Hp联合检测对肝癌早期诊断的意义与价值,主要进行了以下几方面研究并得到如下结果：1、用AFP、Hp抗原免疫Balb/C小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经高通量筛选分别筛选到14和16株阳性杂交瘤细胞,用有限稀释法进行亚克隆化,单克隆细胞阳性孔率为100%,最终,AFP组和Hp组分别得到6株和7株分泌单克隆抗体的细胞株,经蛋白A亲和纯化获得相应单克隆抗体。2、通过ELISA方法对筛选的抗体进行效价检测和表位分析,两组抗体效价可达10-9,AFP组#8-7-1、#5-1-1为针对不同表位抗体,Hp组#3-1-1、#6-2-2是针对不同表位抗体,且ELISA双抗体夹心法灵敏度均可达纳克级；采用亚型鉴定试剂盒对4株抗体进行亚型鉴定,结果显示4株抗体轻链类型均为κ,除#8-7-1重链类型为IgG1外,其余抗体重链类型为IgG2b。3、以线性范围和重复性为检验指标,通过CLIA法对检测体系进行优化,并最终建立AFP、Hp检测体系为：AFP组用pH9.0K2HPO4溶液系统包被1.5μg/mL AFP#8-7-1,Hp组pH7.2磷酸盐缓冲系统,包被浓度为2μg/mL。以0.15mol/L PBS,2%BSA,0.1%Proclin300, pH7.2为两检测体系的封闭液；1.5%NaCl,0.2%BSA, pH7.2为两检测体系的样本稀释液；0.1mol/L TRIS-HC1,10%小牛血清,0.1%Proclin300,pH7.2为两检测体系的酶标稀释液,反应模式为“1小时+1小时”。4、通过绘制标准曲线和检测质控品对检测体系进行评估,本研究AFP组线性上限可达800ng/mL, Hp组为1000ng/mL,线性相关系数均大于0.99；两组检测体系的准确性较高,相对偏差均小于7%；最低检测限均为0.85ng/mL;且不与CEA、HCG发生交叉反应。AFP检测体系与罗氏试剂检测结果进行对比,200例血样检测结果显示两种方法一致性较好,相关系数达0.95以上。5、通过CLIA法对100例健康人血清进行检测,确定两组检测体系的正常范围分别为0-10ng/mL、1000-1500μg/mL。并对随机抽取的100例肝癌患者血清、100例肝炎肝硬化患者血清和50例正常人血清进行AFP、Hp检测试剂联合检测,结果显示联合检测的灵敏度为90%,特异性为88%,相比于AFP(80%,69%)或Hp(82%,85%)单独检测有明显提高,取得了较为满意的结果,更有利于对肝癌的早期诊断。