【目的】:上皮性卵巢癌最为突出的分子特征是TP53突变率达97%,TP53突变的细胞被认为G1/S细胞周期检查点缺陷,此类细胞强烈依赖G2/M检查点阻滞细胞周期,修复损伤的DNA,因此,利用Wee1抑制解除G2/M细胞检查点,达到合成致死的目的,被认为在卵巢癌治疗领域具有广阔的应用前景,然而最终不能规避原发性、继发性耐药的产生,影响到药物的临床应用推广。我们的研究致力于探究Wee1抑制的耐药机制,提出解决方案。【方法】:利用高通量蛋白质阵列（RPPA）研究分析了Wee1抑制剂处理后的卵巢癌细胞,采用western blotting对Wee1处理后的卵巢癌细胞作用的现象进行再次验证。采用CCK8,克隆形成分析了Wee1抑制剂联合mTOR抑制剂对卵巢癌细胞增殖的影响,流式细胞分析细胞凋亡和周期,免疫荧光研究细胞DNA损伤;采用DNA fiber分析了肿瘤细胞的复制压力;采用了PDX体内模型验证了肿瘤抑制效应。【结果】:我们的研究通过高通量蛋白质阵列（RPPA）分析发现Wee1抑制剂处理卵巢癌细胞后,mTOR通路互补激活,并且通过western blotting验证了在卵巢癌细胞短期暴露及长期暴露于Wee1抑制剂AZD1775后mTOR均存在互补激活。我们采用CCK8,克隆形成分析了Wee1抑制剂联合mTOR抑制剂对卵巢癌细胞的杀伤效应。流式细胞分析了联合抑制Wee1及mTOR后的细胞凋亡和细胞周期变化。进一步采取免疫荧光研究Wee1抑制剂联合mTOR抑制剂对卵巢癌细胞的DNA损伤作用;采用DNA fiber直观分析了联合抑制Wee1及mTOR后肿瘤细胞的复制压力;采用了反向添加d NTPs对联合抑制Wee1及mTOR的作用进行了拯救。并采用了最能体现患者肿瘤分子特征和异质性的PDX体内模型,验证了联合抑制Wee1及mTOR对卵巢癌肿瘤的体内杀伤效应。采用免疫组织化学对PDX的肿瘤组织标本进行了mTOR通路,DNA损伤及复制压力标志RPA32进行分析,与体外实验的结论一致。【结论】:我们的研究证实双重Wee1/mTOR抑制诱导了大量的DNA复制应激,导致复制叉失速和DNA损伤,核苷酸代谢底物的耗竭是Wee1抑制剂和mTOR抑制剂协同作用的必要条件。我们的研究为Wee1抑制剂治疗上皮性卵巢癌开辟了更广阔的治疗窗口。