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目的:1.通过对瓜蒌皮药材粉末特征物的观察,选取瓜蒌皮中的石细胞为显微特征细胞,建立瓜蒌皮的显微定量研究方法,并测定10个不同地区瓜蒌皮石细胞的显微特征常数。2.通过对瓜蒌皮药材中总黄酮成分超声提取工艺的优化,优选出总黄酮超声提取的最佳工艺,并测定10个不同地区瓜蒌皮药材中总黄酮的含量。3.建立瓜蒌皮药材中芦丁、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、山奈酚5种黄酮类成分的含量测定方法,并测定10个不同地区瓜蒌皮药材中5种黄酮类成分的含量,为瓜蒌皮药材的质量控制提供数据参考。4.建立10个不同地区瓜蒌皮药材的HPLC指纹图谱,为瓜蒌皮药材的定性鉴别提供研究支持。5.建立瓜蒌皮药材中显微特征常数与总黄酮成分含量及各黄酮类单体成分含量之间的相关性,并研究分析,为多维度的评价瓜蒌皮药材质量提供参考依据。材料与方法:1.采用均匀设计法考察瓜蒌皮药材中石细胞显微特征常数测定的条件,通过考察样品取样量、粉碎粒度及加入甘油量,最终确定U6(63)的设计方案,通过均匀设计软件得出优化结果,按照最佳工艺条件测定10个不同地区的瓜蒌皮石细胞的显微特征常数。2.在单因素试验基础上,通过L9(34)正交试验设计优选最佳超声提取工艺条件。考察液体材料的比例、超声温度、超声时间及超声功率等因素对瓜蒌皮总黄酮成分含量提取工艺的影响。同时采用紫外分光光度法,测定瓜蒌皮药材中总黄酮成分的含量。3.采用高效液相色谱法测定瓜蒌皮药材中芦丁、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、山奈酚的含量,并运用spss19.0统计软件以各成分作为指标进行主成分分析和快速聚类分析,采用变异系数权重法对瓜蒌皮药材质量进行综合评价。4.采用高效液相色谱法,以梯度洗脱的方式建立瓜蒌皮药材的指纹图谱,色谱柱:安捷伦Eclipse XDB-C18(参数:4.6mm×250mm,5μm);流动相为A:甲醇-乙腈(1:10),B:0.1%磷酸溶液;流速:1.0 m L·min-1;检测波长:360 nm;柱温:30℃,进样量:20μL,同时对不同收集地的瓜蒌皮样品作聚类分析。5.通过采用spss19.0统计软件,研究瓜蒌皮石细胞的显微特征常数—瓜蒌皮中黄酮类单体成分含量—瓜蒌皮中总黄酮成分含量之间的相关关系。结果:1.均匀设计软件给出的结果即最优条件为:样品称样量100 mg左右,粉碎过120目筛,加水合氯醛试液定容至刻度。不同收集地的瓜蒌皮粉末中石细胞显微特征常数有显著不同,在10个收集地中,6号收集地(河南)的显微特征常数最大,为331个/mg,9号收集地(安徽1)的显微特征常数最小,为120个/mg。2.本实验采用甲醇为提取溶剂进行工艺考察。在单因素研究的基础上,通过正交试验法优选得到瓜蒌皮总黄酮提取的最佳工艺为料液比1:8(g/m L),超声时间40分钟,超声温度60℃,超声功率180 W。在此最佳工艺下测得9收集地(安徽1)总黄酮含量为8.22 mg/g。采用最佳工艺条件,对10个不同收集地的瓜蒌皮药材进行总黄酮的含量测定,发现不同收集地间总黄酮的含量差别较大。其中9号收集地(安徽1)的含量最高,为7.68 mg/g;而1号收集地(河北1)与5号收集地(河北5)的含量最低,分别为4.32 mg/g和4.85 mg/g。3.含量测定结果表明,10个不同收集地瓜蒌皮药材中均含有5种黄酮类成分。其含量范围分别为芦丁20.35~406.9μg·g-1、异槲皮苷41.38~198.8μg·g-1、槲皮苷3.324~14.82μg·g-1、槲皮素14.21~60.86μg·g-1、山奈酚11.96~49.47μg·g-1。不同收集地瓜蒌皮药材中黄酮类各成分含量差异较大,异槲皮苷累积方差贡献率为95.51%,聚类分析结果表明9号收集地(安徽1)瓜蒌皮药材的质量最好。4.建立了瓜蒌皮药材的指纹图谱,取10个不同批次的瓜蒌皮药材,根据色谱峰的稳定性与代表性,共标定了10个共有峰。10批瓜蒌皮药材,8批药材的指纹图谱相识度均在0.90以上,说明按本方法进行指纹图谱分析,其相似性良好。5.通过spss19.0统计软件对瓜蒌皮显微特征常数与槲皮素含量与总黄酮含量进行多元相关性分析,以槲皮素含量为自变量X1,显微特征常数为自变量X2,总黄酮含量为因变量,输出结果:相关系数r=0.765,决定系数R2=0.775,F=12.025,P=0.002,Y=81.997X1+0.011X2+0.941。结果具有统计学意义。方便用显微定量法测定瓜蒌皮中槲皮素、总黄酮的含量,结果表明建立的方法能够方便、快速的计算瓜蒌皮中槲皮素的含量,为瓜蒌皮药材在含量测定方面提供新的、快捷的思路与方法。结论:1.不同收集地的瓜蒌皮药材石细胞显微特征常数存在一定的差异,由此可作为区别不同地区瓜蒌皮药材质量的依据之一,该方法稳定可靠,为鉴别不同地区的瓜蒌皮药材以及石细胞显微定量标准的制定提供参考依据,还为显微特征常数与化学成分之间的相关分析奠定基础。2.超声提取瓜蒌皮药材中总黄酮,具有简单、省时、高效的优点。不同产地瓜蒌皮药材中总黄酮含量差异较大,造成差别的原因可能由于地理环境及气候的不同。因此,对于瓜蒌皮药材的使用需要区分产地。3.建立的高效液相色谱法测定瓜蒌皮中5种黄酮类成分含量的方法,结果可靠、操作简便,以异槲皮苷为公共因子变量,可以更全面的对瓜蒌皮药材进行质量控制,变异系数权重法9号收集地(安徽1)瓜蒌皮药材综合评价得分最高。4.建立的指纹图谱方法学考察各项内容均符合要求,可用于瓜蒌皮药材的定性鉴别。5.建立石细胞显微特征常数与黄酮类各成分含量以及总黄酮含量的相关性研究,为瓜蒌皮药材的质量评价,从显微鉴定的角度给出了新的参考。