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[目的]1.研究左半结肠和右半结肠的癌组织和相应正常组织中细菌生物膜阳性率的表达水平差异;2.研究生物膜阳性和生物膜阴性的癌组织标本中丁酸和LL-37的表达水平差异,并用统计学方法探究丁酸和LL-37表达是否具有相关性;3.研究生物膜阳性和生物膜阴性的正常组织标本丁酸和LL-37的表达水平差异,并用统计学方法探究丁酸和LL-37表达是否具有相关性:4.通过本课题实验研究探讨细菌生物膜介导的丁酸和LL-37下调在肠癌发病过程中所起的重要作用,提出细菌生物膜可能是通过下调肠道上皮细胞LL-37的表达水平逃逸机体对其的免疫杀灭作用,为了解肠道细菌生物膜的自身特性及其致癌机理提供新的研究思路。[方法]1.总共采集20例右半结肠(指盲肠、升结肠、结肠肝曲和横结肠)和20例左半结肠(结肠脾区、降结肠、乙状结肠和直肠)的肠癌手术标本,分别用FISH实验对癌组织和对应的远端正常组织的生物膜进行检测,其中生物膜阳性被定义为粘液层的细菌入侵量>109个/ml,肠上皮表面的生物膜的厚度(指线性距离)≥200μm[27];2.采用免疫组化法检测上述40例生物膜阳性和生物膜阴性的癌组织标本中LL-37的分布情况,并应用qRT-PCR技术检测所有癌标本中LL-37 mRNA的表达水平和用ELISA法检测所有癌标本中丁酸和LL-37的表达水平,探讨生物膜、丁酸和LL-37三者之间的相关性;3.同理,采用免疫组化法检测上述40例生物膜阳性和生物膜阴性的正常组织标本中LL-37的分布情况,并应用qRT-PCR技术检测所有正常标本中LL-37 mRNA的表达水平和用ELISA法检测所有正常标本中丁酸和LL-37的表达水平,进一步探讨生物膜、丁酸和LL-37三者之间的相关性。[结果]1.右半结肠癌组织标本的生物膜阳性率明显高于左半结肠的癌组织标本,而右半结肠正常组织标本的生物膜阳性率也明显高于左半结肠的正常组织标本。而且结果显示癌组织标本生物膜阳性水平与相应的正常组织标本一致,即生物膜阳性的癌组织标本,其对应的正常组织标本生物膜也为阳性;生物膜阴性的癌组织标本,其对应的正常组织标本也为阴性。2.生物膜阳性的癌组织标本的LL-37 mRNA和蛋白质的表达水平明显低于生物膜阴性的癌组织标本,差异具有显著性(P<0.05);生物膜阳性的癌组织标本丁酸的表达水平也明显低于生物膜阴性的癌组织标本,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.生物膜阳性的正常组织标本的LL-37 mRNA和蛋白质的表达水平明显低于生物膜阴性的正常组织标本,差异具有统计学意义(P<0.05);生物膜阳性的正常组织标本丁酸的表达水平也明显低于生物膜阴性的正常组织标本,差异具有显著性(P<0.05)。[结论]1.研究结果显示右半结肠的癌组织生物膜阳性率极高,而左半结肠的癌组织生物膜阳性率很低。这提示左半结肠的肠道菌群可能以一种生物膜非依赖性的方式致癌,而右半结肠肿瘤的发生发展可能与生物膜形成密切相关;2.生物膜阳性的癌组织标本LL-37和丁酸的表达水平都明显高于生物膜阴性的癌组织标本。同浮游状态相比,细菌形成生物膜后的产丁酸能力可能会明显下降;而生物膜阳性标本中LL-37的表达下降可能是由丁酸水平降低引起;3.同理,生物膜阳性的正常组织标本LL-37和丁酸的表达水平都显著高于生物膜阴性的正常组织标本;4.细菌生物膜可能通过抑制丁酸的产生进一步降低LL-37的表达。一方面,LL-37的表达水平降低有利于细菌生物膜的形成,使其逃逸机体的免疫防御;另一方面,低水平的丁酸和LL-37使其对肿瘤细胞的促凋亡作用减弱,最终导致肠癌的发生。