【摘 要】
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用自行设计的培养基从腾冲热海样品中分离到8株高温蛋白酶产酶菌株;经过复筛,得到高温蛋白酶高产菌株YMTC1010和YMTC1049.经过形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析.将
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用自行设计的培养基从腾冲热海样品中分离到8株高温蛋白酶产酶菌株;经过复筛,得到高温蛋白酶高产菌株YMTC1010和YMTC1049.经过形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析.将菌株YMTC1010初步鉴定为厌氧芽孢杆菌属菌株(Anoxybacillus sp.)菌株YMTC1049初步鉴定为嗜热脂肪泥土芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus).用多因素正交试验设计,考察了菌株YMTC1049在不同水平的pH、酷蛋白、葡萄糖和温度培养条件下,对产生高温蛋白酶酶活的影响,在影响菌株YMTC1049产生高温蛋白酶的各因子中,酷蛋白具有高度显著性影响,温度具有显著性影响.获得最佳培养条件为: pH7.0、酷蛋白浓度1.5﹪、葡萄糖浓度0.5﹪、温度70℃.在此优化条件下培养24h,上清液蛋白酶活力可达到312U/ml.min.菌株YMTC1049发酵液经离心、硫酸铵沉淀、透折、DEAE-SephadexA50离子交换柱层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析、Superdex G-75凝胶过滤层析等分离纯化步以骤,纯化后的高湿蛋白酶样品活力可达889.2U/mg.min,得率为10.7﹪,纯化倍数2.85.经SDS-PAGE电泳分析,该酶由四个亚基组成,亚基的分子量分别约为14kDa, 17kDa,27kDa和45kDa.在55-94℃内均有活力,最适反应温度85℃,pH5.5-9.0,最适pH7.5,在pH7.5缓冲液中85℃保温12h酶活力无变化,16h酶活力剩余70﹪.Pb<2+>、Ba<2+>、Ni<2+>、Fe<2+>、Fe<2+>、Cu<2+>、Sn<2+>、Co<2+>、Mn<2+>和EDTA不同程度地抑制该酶的活性,Sr<2+>、K<+>、Mg<2+>、Li<+>、Ca<2+>、Zn<2+>不影响酶的活性.
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