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本研究首先克隆了小鼠血清白蛋白基因启动子(ALBgenepromoter,Palb)与增强子(ALBgeneenhancer,Ealb),构建了受其调控的5种表达载体,然后在细胞水平分析比较载体的转录活性或杀伤能力,选择出了细胞水平活性较高的载体进行转基因小鼠雄原核显微注射,获得了目的基因HSV-tk整合与特异表达的转基因小鼠品系。进一步通过尾静脉注射GCV诱导转基因小鼠肝脏损伤,以四氯化碳(carbontetrachloride,CCl4)损伤小鼠为对照观察疾病的进程。通过血液的生化检查,肝脏与肾脏等组织的病理形态学分析来研究转基因小鼠的损伤效应。本研究为肝病转基因动物模型的建立,为探讨肝病的发病机制、病理生理过程、病理形态改变及药物防治等研究开拓了广阔的前景。
本研究通过参阅文献,将查阅到的小鼠血清白蛋白基因调控元件功能区与GenBank小鼠基因组序列进行同源比较,从而确定我们需要克隆的区域。利用巢式PCR扩增Palb,利用可信度极高的TaqDNA聚合酶(PyrobestTM)扩增Ealb序列。
本研究成功产生了肝脏表达HSV-tk的转基因小鼠。通过GCV注射诱导肝脏损伤后产生了具有组织病理形态学与临床生物化学特征(ALT,AST,TBIL)的肝细胞疾病。