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Oddi括约肌功能障碍(sphincter of Oddi dysfunction,SOD)是由Oddi括约肌(sphincter of Oddi ,SO)处梗阻所导致的一组以慢性胆道疼痛或复发性胰腺炎为主要表现的综合症,是引起胆囊切除术后综合征( post-cholecystectomy syndrome,PCS)的重要原因之一,多发于胆囊切除术后[25]。由于其发病机制不清,SOD诊治一直困扰着临床医生和患者。目前研究多是从SO的运动调节去阐明SO的运动异常,但均不能确切解释这一现象,需进一步建立胆囊切除术模型研究胆囊切除术后SO的组织结构改变及可能的机制。SO是位于胆管、胰管和十二指肠结合部位的神经肌肉复合体,受神经体液的双重调节,且与胆囊间存在局部神经反射。Luman等[1]报道胆囊切除术至少一过性的抑制了药理剂量的CCK对SO的抑制作用。Wang等[2]对高胆固醇血症兔SOD模型的研究中发现SO细胞内存在着Ca2+过载现象。而钙通道阻滞剂[3]如硝苯地平给药可降低无症状志愿者及有症状SOD患者括约肌基础压,改善临床症状。Ca2+浓度的改变不仅直接介导肌细胞收缩,还能调节其相关信号途径引起下游效应分子的改变。CaN-活化T细胞核因子(Nuclear Factor of Activated TCells ,NFAT)途径广泛存在于心肌、骨骼肌、逼尿肌、血管平滑肌等组织细胞,在T细胞活化中其关键作用,并参与心肌、骨骼肌及逼尿肌肥大的发生。在病理性心肌肥大的研究中[4]发现,细胞质内Ca2+浓度升高,迄今发现的唯一受Ca2+ /钙调素( Calmodulin, CaM)调节的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)被激活,经一系列信号转导,活化肥大相关基因,使肌球蛋白重链(Myosin heavy chain, MHC由以α-MHC为主向以β-MHC为主演变,心脏成纤维细胞转化生长因子β(TGF-β)合成增加,引起心肌细胞肥大。为此,本实验行兔胆囊切除,检测SO压力变化,观察术后SO组织结构及功能蛋白表达变化,并检测术后早期SO组织内钙调神经磷酸酶(CaN)催化亚单位α、β(CnAα、CnAβ) 2种亚型的表达变化,探讨其在胆囊切除术后SOD发生中的作用,为临床治疗提供新的思路。目的行兔胆囊切除术,检测SO压力变化,观察胆囊切除术后早期Oddi括约肌功能蛋白表达及结构变化;检测钙调神经磷酸酶(CaN)催化亚单位α、β(CnAα、CnAβ) 2种亚型的表达变化,探讨其在这一过程中的作用。方法68只新西兰大白兔,分为4组,A组仅行开腹术暴露胆囊,术后饲养4周,B、C、D组行胆囊切除术,分别饲养2、4、8周。A组、C组各8只行Oddi括约肌测压后取Oddi括约肌标本行HE染色;其余直接切取Oddi括约肌标本后行相应检测:A、D组各取2只行透射电镜检测;A、B、C、D组各12只行Western blot检测肌球蛋白重链(MHC)表达变化,RT-PCR、Western blot检测CnAα、CnAβmRNA和蛋白表达变化。结果①胆囊切除4周后SO基础压和锋压明显增高②透射电镜示:与对照组比平滑肌细胞内密体增多;Western blot可检测到术后2周、4周、8周MHC蛋白表达逐渐增加(P <0.01)。③RT-PCR可检测到术后4周与对照组比CnAβmRNA表达增加,8周下降(P <0.01)。Western blot可检测到术后2周、4周、8周CnAβ蛋白表达逐渐增加(P <0.01)。CnAαmRNA及蛋白表达均无显著变化。结论1.胆囊切除术后SO的运动功能增强。2.兔胆囊切除术后可致Oddi括约肌组织超微结构发生改变、MHC表达增加。3. MHC表达增加原因可能与CnAβ表达增高有关,这可能在胆囊切除术后SOD的发病过程中起一定的作用,是SOD多发生于胆囊切除术后患者的分子机制之一。本实验为进一步探索SOD的发生机制提供了有益的帮助,并为临床治疗提供了新的思路。