[目的]:以小鼠外周血嗜酸性细胞(EOS)为研究对象,从细胞、分子水平探讨疏风通络方含药血清对体外小鼠外周血嗜酸细胞脱颗粒过程影响的分子机制研究。[方法]:1.采用磁珠分选(MACS)法提取高纯度小鼠外周血嗜酸性粒细胞。2.通过小鼠外周血嗜酸性粒细胞原代培养建立体外实验模型。3.通过迪夫快速(Diff-Quick)染色观察嗜酸性粒细胞形态学特征。4.实验分组:空白组、阴性对照组、Ly294002(PI3K抑制剂)组、SB328437(CCR3受体拮抗剂)组、SB203580(p38蛋白激酶拮抗剂)组、PD98059(MEK1/MEK2激酶拮抗剂)组、U0126(MEK1/MEK2激酶拮抗剂)组、PD184352(MEK1/MEK2激酶拮抗剂)组及中药疏风通络方含药血清低剂量组(10.2g/(kg·d))、中剂量组(20.4g/(kg·d))和高剂量组(40.8g/(kg·d))。5.通过CCK-8试剂盒检测不同浓度的Eotaxin/CCR3信号通路抑制剂对小鼠外周血嗜酸性粒细胞增值活力的影响,并采用ELISA检测小鼠外周血嗜酸性粒细胞脱颗粒后释放的颗粒蛋白,包括:主要碱性蛋白(MBP)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)、嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)以及嗜酸性粒细胞衍生的神经毒素(EDN)等毒性物质的表达。[结果]:(1)与对照组相比,予抑制剂U0126处理后,10u M、20u M、50u M的U0126对小鼠外周血EOS均有一定的抑制作用,且当浓度为20u M时,抑制效果更佳(p<0.01)。予抑制剂SB203580处理后,20u M、50u M的SB203580对小鼠嗜酸性粒细胞均有一定的抑制作用,且当浓度为20u M时,SB203580的抑制效果更好(p<0.01),而予10u M的SB203580抑制效果太明显(p>0.05)。予10n M、20n M、40n M抑制剂PD184352及SB328437时,三种浓度均有抑制效果,且当浓度为40n M时,两者抑制效果更佳(p<0.01)。予5u M、10u M、20u M的Ly294002,三种浓度均能表现出对小鼠外周血中EOS增殖活力的抑制作用,且当浓度为20u M时,Ly294002的抑制效果更为明显(p<0.01)。予50u M、80u M、100u M的PD98059时,80u M、100u M均有一定的抑制效果,且当浓度为100u M时抑制效果更佳(p<0.01),而浓度为50u M的PD98059的抑制效果却不太明显(p>0.05)。予中药疏风通络含药血清低、中、高剂量显示,三种浓度的药物均有一定的抑制作用,但以高剂量组抑制作用更为显著(p<0.01)。故而得出:20u MU0126、20u MSB203580、40n MPD184352、20u MLy294002、100u MPD98059、40n MSB328437以及中药疏风通络含药血清高剂量为抑制小鼠嗜酸性粒细胞增值活力的最佳给药浓度,该结果将用于后续研究;(2)与对照组相比,中药疏风通络方含药血清组、CCL11+疏风通络方含药血清组、CCL24+疏风通络方含药血清组亦能不同程度的抑制小鼠外周血中嗜酸性粒细胞颗粒蛋白EPO、MBP、EDN、ECP的表达(p<0.01);且中药疏风通络含药血清组优于CCL11+中药疏风通络含药血清组和CCL24+中药疏风通络含药血清组(p<0.05),而CCL11+中药疏风通络含药血清与CCL24+中药疏风通络含药血清相比,二者抑制效果并无明显差异(p>0.05)。[结论]:1.Eotaxin/CCR3信号通路在小鼠外周血中嗜酸性粒细胞活化、脱颗粒过程中具有重要作用,Eotaxin与其受体CCR3结合可激活Eotaxin/CCR3信号通路,产生下游放大效应,进而促进小鼠外周血中嗜酸性粒细胞活化、脱颗粒,释放EPO、MBP、EDN、ECP等细胞活性物质,诱发哮喘。2.抑制Eotaxin/CCR3信号通路,能够显著抑制小鼠外周血嗜酸性粒细胞的活化及脱颗粒功能的发挥,进而抑制哮喘发作或加重。3.中药疏风通络方含药血清能够显著降低小鼠外周血嗜酸性粒细胞脱颗粒蛋白EPO、EDN、ECP、MBP的表达,进而抑制哮喘发作或加重。因此,中药疏风通路方可能通过抑制Eotaxin/CCR3信号通路抑制小鼠嗜酸性粒细胞活化及其脱颗粒功能的发挥,改善气道炎症,进而抑制哮喘发作或加重。中医疏风通络法调控嗜酸性粒细胞活化Eotaxin/CCR3信号通路可能是潜在的改善支气管哮喘气道慢性炎症的重要分子机制。